舌叶紫菀化学成分的研究

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舌叶紫菀Aster lingulatus Franch为菊科紫菀属,多年生草本。主要分布在四川省西南部的高原地区以及云南省的西北部(中甸、丽江等)。生长在海拔2600~3600米[1]之间的亚高山以及高山草地或松林下。舌叶紫菀是传统藏药“美多罗米”的基原植物之一。在藏医临床应用的成方制剂中为“九味藏紫菀花散”的主要成分,用于瘟疫症寒性“龙病”和“黄水病”。先前的研究主要集中在中药紫菀的研究,对青藏高原紫菀属植物的研究极少。青藏高原分布有数十种紫菀属植物,舌叶紫菀是其中的一种,其资源丰富,有极高的开发和利用价值,但缺乏系统的研究,严重阻碍其资源的开发利用。因此,本文对其化学成分及其药理活性做了如下探究。(1)建立UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS分析技术,对舌叶紫菀中的化学成分进行定性分析,基于准确的分子离子、保留时间、化合物质谱裂解规律与化合物的二级质谱信息并结合Chemspider、Pubchem等数据库对舌叶紫菀的化合物进行推测。最终共鉴定出舌叶紫菀中80个可能性化学成分,其中包括36个黄酮类、16个苯丙素类、14个有机酸类、3个环烯醚萜类、2个蒽醌类以及氨基酸糖苷等。(2)采用半制备色谱及多种柱色谱技术(硅胶柱、Sephadex LH-20柱、RP-18硅胶柱等)对舌叶紫菀中的化学成分进行分离与纯化,使用不同的波谱方法并结合相关文献资料对分离所得化合物的结构进行鉴定。共分离并鉴定出25个化合物,分别为:正十八烷、木栓酮、friedelan-4-α-methyl-3β-OH、正三十烷醇、紫菀酮、β-谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、对羟基苯甲酸、芦丁、山柰酚、异槲皮苷、槲皮素、芹菜素、夏佛塔苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷、山柰酚-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、5-咖啡酰奎尼酸、绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、4-咖啡酰奎宁酸、3-O-反式阿魏酰基奎宁酸。化合物(1~25)均首次从菊科紫菀属植物舌叶紫菀的全草中分离得到。(3)采用QAMS法同时测定不同地区舌叶紫菀根、茎、叶中12种化学成分的含量。根据实验结果对11批舌叶紫菀根、茎、叶的化学成分进行差异化分析。结果显示,舌叶紫菀根、茎、叶中的12种化学成分差异化显著;隐绿原酸、绿原酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸B、灯盏花甲素、槲皮素、芹菜素、山奈酚的含量受部位因素的影响很大,而新绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C则不受舌叶紫菀部位的影响。对于不同采集地区的舌叶紫菀来说,隐绿原酸、绿原酸、新绿原酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C的含量受地区因素的影响很大,而灯盏花甲素、槲皮素、山奈酚、芹菜素则不受地区的影响,且灯盏花甲素、槲皮素、山奈酚、芹菜素为黄酮类成分,说明不同地区之间舌叶紫菀中黄酮类成分的含量差异较小。(4)采用大孔树脂分离纯化舌叶紫菀粗提物,分别得到A、B、C段提取物,采用清除DPPH自由基、ABTS自由基以及对Fe3+的还原能力法来评价其体外抗氧化能力。结果表明,舌叶紫菀A、B、C段提取物具有很强的清除自由基及Fe3+的还原能力,表现出良好的体外抗氧化活性,其中A段抗氧化活性明显高于B、C段。(5)采用cck8法对舌叶紫菀粗提物及其分离纯化得到的5个酚酸类单体化合物1~5(4-咖啡酰奎宁酸、5-咖啡酰奎尼酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸)进行抗肿瘤活性评价,肿瘤细胞选用A549。结果显示,舌叶紫菀粗提物在一定程度上能抑制A549;化合物1、2的抑制作用则相对较小,但高剂量组与对照组相比存在显著差异;化合物3、4、5的抑制作用较明显,其抑制作用随浓度的增大而增大。
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