猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)是20世纪80年代末发现的一种高度传染性疾病,能引起妊娠母猪的流产、死胎、木乃伊等繁殖障碍症状,以及各种年龄猪(特别是仔猪)的呼吸道症状。PRRSV感染能降低猪体免疫力,常引起其他病原微生物的继发或并发感染,加重病情。该病在世界许多国家和地区的广泛流行,已经造成了巨大的经济损失,严重影响着世界养猪业的发展。我国自1995年爆发此病以来,现已成为规模化猪场引发猪繁殖障碍和呼吸道疾病的主要病原之一。特别是这两年爆发的高致病性蓝耳病,更是对国内的养猪业造成了沉重打击。为了更有效的预防和控制PRRSV的爆发,本研究对PRRSV的非结构蛋白(RdRp)和结构蛋白(ORF3、ORF5)进行了克隆、表达,并用表达产物建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法,结果如下:1、根据GenBank中猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV)的基因序列,分别针对PRRSV RdRp、ORF3和ORF5基因设计3对特异性引物,通过RT-PCR方法,将PRRSV RdRp、ORF3和ORF5基因克隆入pMD18-T载体,筛选出阳性重组质粒进行测序,分别得到了约为720bp、585bp和498bp大小的目的片段。2、将目的基因片段RdRp、ORF3和ORF5克隆到原核表达载体Pet-32a(+),构建重组表达质粒Pet-RdRp、Pet-ORF3和Pet-ORF5。并将其转化至BL21中,用IPTG诱导表达,分别得到分子量约为46KDa、42KDa和38KDa重组蛋白。3、将大量诱导表达重组蛋白,利用His-Bind蛋白纯化试剂盒进行纯化,以纯化后的重组蛋白作为诊断抗原,通过对抗原浓度、血清浓度和血清作用时间等ELISA条件的摸索,初步建立了一套检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。本研究成功地对广东地区PRRSV流行株进行了分离、鉴定,并对RdRp、ORF3和ORF5几个基因克隆及蛋白的原核表达和间接ELISA方法的初步研究。为进一步从分子水平上对揭示PRRSV的非结构蛋白和结构蛋白的分子特征,为PRRSV分子流行病学的研究提供理论依据,也为PRRSV的诊断及预防提供了新的物资材料和理论资料。