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Spred (Sprouty related with EVH1 domain)蛋白家族是一类酪氨酸激酶结合蛋白。Spred蛋白由三个结构域组成,分别为：N端EVH-1结构域,中央KBD结构域和C端SPR结构域。目前哺乳动物中发现的Spred蛋白家族成员主要为Spred-1、Spred-2、Spred-3和Eve-3。 Spred-3缺少KBD结构域,Eve-3仅含有EVH-1结构域。Spred特异性抑制多种生长因子诱导的Ras/Raf/Erk信号通路活化,抑制细胞分化,但具体机制复杂,有待进一步阐明。Spred2在不同腺体和分泌组织中均有较高表达,主要定位于细胞内囊泡状结构,与循环内吞体标志蛋白Rab11共定位。Rab11参与细胞内囊泡运输,促进神经突生长。我们之前的研究及其他研究均表明,Spred-2抑制大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞PC12分化,但机制不明。我们推测Rab11可能参与Spred-2调控的PC12细胞分化。本研究发现Spred-2与Rabll相互作用,并且与自噬标志蛋白LC3存在共定位。研究结果如下：1、免疫荧光检测HeLa细胞内源Spred-2与内源Rab11定位,结果表明二者在胞浆中存在聚点状的共定位；将Myc-Spred-2与HA-Rab11共转至293T细胞经Anti-Myc抗体免疫共沉淀,免疫印迹结果表明Spred-2与Rab1 1存在相互作用。2、将Myc-Spred-2野生型及其各个结构域缺失突变体,分别与HA-Rab11共转至293T细胞,以Anti-Myc抗体免疫共沉淀,免疫印迹结果表明Spred-2蛋白通过C端的KBD与SPR结构域与Rabll相互作用。3、将Myc-Spred-2、DsRed-Rab11及绿色荧光蛋白标记的LC3(GFP-LC3)共同转染至HeLa细胞,免疫荧光结果表明Spred-2、Rab11及LC3三者在胞浆存在共定位。4、分别将Myc标签空载体,Myc-Spred-2野生型及SPR结构域缺失突变体与DsRed-Rab11和GFP-LC3,共转至HeLa细胞,免疫荧光结果表明Spred-2蛋白SPR结构域为Rab1 1与LC3共定位所必需。5、共转DsRed-Rabll与GFP-LC3至HeLa细胞,再分别使用雷帕霉素(Rapa)与氯喹(CQ)处理,免疫荧光结果表明Rapa促进Rab11与LC3共定位,而CQ抑制二者共定位。6、分别将Spred-2野生型及其突变体重组腺病毒感染PC12细胞,神经突触生长分析结果表明SPR结构域及其与LC3结合位点为Spred-2抑制PC12细胞分化所必需。综上所述,Spred-2抑制PC12细胞分化可能通过C端区域与Rab11相互作用,抑制Rab11l参与细胞分化的功能。Spred-2缺失SPR结构域,Rab11释放,并促进神经突生长。另外,Spred-2参与自噬,在自噬溶酶体形成后与Rab11及LC3形成蛋白复合体,从而抑制PC12细胞分化。