多杀菌素固体发酵技术的研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luobo330
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通过对多杀菌素产生菌刺糖多孢菌(Saccharopolyspora Spinosa)G9菌株进行分离复壮,得到一株遗传性能较稳定的菌株G9-34,以G9-34为出发菌株,进行紫外线物理诱变和NTG化学诱变,得到了抗PG的菌株A-N112(183ug/ml)和抗纳他霉素菌株N-N252(172ug/ml)比出发菌株G9提高了37%和29%。然后进行3轮基因组重排后得到了F235效价为208ug/ml,比亲本G9(133ug/ml)提高了49.64%传代试验表明F235传代比较稳定。以F235菌株为试验菌株进行发酵配方筛选,摸索出适合固体发酵的不同氮源、不同碳源、及其他因素对多杀菌素生物合成的影响,通过六因子十水平的均匀设计试验,爬坡试验以及响应面的试验,对培养基进行了优化。在优化的培养基中,多杀菌素的产素水平为526 ug/ml,与优化前的原始培养基205 ug/mL比较,优化后的培养基可以使效价提高152.9%。多杀菌素的固体发酵最优培养基配方为:葡萄糖8.37%,棉籽饼粉9%,KH2P040.47%,玉米浆3.75%,酵母粉0.3%,甘露醇3.5%。另外,进行了接种量、种龄、装料量、温度以及pH等固体培养条件的优化试验,筛选出适合F235菌株产素的最佳发酵条件如下:接种量10%、种龄60h、初始pH值为7.0,装料量25g(湿料)/250ml。
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