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目的研究TGF-β/Smad信号通路与TGF-β/非Smad信号通路对肝脏祖细胞(HPCS)发生EMT的影响。方法1.用TGF-β1(10ng/ml)分别刺激WB-F344细胞和LE-6细胞三天,利用细胞免疫荧光观察细胞形态,用Western blotting细胞检测上皮、间质蛋白。2.WB-F344和LE-6细胞用TGF-β1(10ng/ml)处理不同时间,用通过Western Blot检测MAPK信号通路和Smad信号通路的相关蛋白磷酸化水平。2.非Smad通路包括ERK信号通路、JNK信号通路和MAPKP38信号通路。我们用ERK信号通路特异性抑制剂U0126、JNK信号通路特异性抑制剂SP600125和MAPKP38信号通路特异性抑制剂SB203580分别阻断三条信号通路。用等量的TGF-β1分别刺激WB-F344卵圆细胞和LE-6卵圆细胞,通过荧光显微镜、细胞免疫荧光,观察其形态学改变;通过Western Blot技术检测EMT相关蛋白水平;3.建立敲减Smad4的稳定细胞系WB-shs4和LE-6sis4,并用Western Blot进行鉴定,通过Western Blot检测P-ERK、P-c-jun和P-p38蛋白磷酸化水平以及EMT相关蛋白水平。结果1、持续给予TGF-β1(10ng/ml)刺激肝脏祖细胞三天,肝脏祖细胞的形态学并没有明显的改变,E-cadherin蛋白减低以及Vimentin蛋白升高都不明显。2、TGF-β可同时激活非Smad信号通(MAPK信号通路)和Smad信号通路3、TGF-β/非Smad信号通路被抑制时,TGF-β/Smad信号通路产生的效应明显增强:形态学明显的改变,肌动蛋白细胞骨架的重组,E-cadherin蛋白明显降低以及Vimentin蛋白明显升高与对照组相比。4、敲减Smad4的稳定细胞系WB-shs4和LE-6shs4与对照组WB-F344和LE-6相比:P-ERK、P-c-jun和P-p38蛋白磷酸化水平上调,E-cadherin蛋白表达升高以及Vimentin蛋白表达下降。结论TGF-β可通过Smad信号通路诱导EMT,但效果不明显,而且我们还发现在肝脏祖细胞中TGF-β可通过激活非Smad信号通(MAPK信号通路)从而来抑制TGF-β通过激活Smad信号通路引起的EMT,这两种通路在肝脏祖细胞发生EMT中起相互拮抗作用,这种发现有助于当前干细胞基础治疗,可能有助于肝纤维化或肿瘤靶向治疗。