NSCs的发现和成功分离及体外培养为SCI的治疗带来了新的希望,NSCs在体外展示的生物学特性使我们有理由相信它可以作为优秀的移植治疗SCI的种子细胞。令人失望的是,一些研究发现这些细胞在移植到成年哺乳动物完整和损伤的脊髓后不能产生神经元,而只能分化成胶质细胞,这和利用NSCs的多潜能性来补充替代损伤中丢失的神经元的初衷相去甚远,从而影响了NSCs在SCI研究领域中的应用。但是,也有一些研究表明尽管NSCs移植到正常未损伤脊髓后没有产生神经元的能力,但移植到损伤的脊髓后却能够分化成一定比例的神经元。我们推测移植时机可能对NSCs移植治疗SCI的效果及其分化具有一定的影响。本研究对该问题进行了深入的探讨,试图找到一个适合NSCs移植治疗SCI的时间窗口,并进一步对其可能存在的机制进行探讨。 目的:1.体外分离培养胚胎大鼠脑和脊髓来源的NSCs并对其生物学特性进行深入研究。2.研究NSCs移植治疗SCI的治疗效果。3.寻找适合NSCs移植治疗SCI的时间窗口,以使NSCs移植能对SCI的修复治疗获得最佳的效果。4.对可能存在的时间窗口存在的机制进行探讨,以期寻找影响NSCs移植效果的相关因素。 方法:从E13d S-D大鼠的脑和脊髓分离获得NSCs,用“神经球”悬浮培养法对其在含bFGF和EGF的无血清条件培养基中进行培养;通过它们的自我更新能力、多向分化潜能以及nestin表达对其进行鉴定,以单克隆实验检查它们的自我更新能力,根据不同特异细胞标志的表达用免疫细胞化学方法对它们产生的子代细胞进行鉴定;用细胞冻存复苏法检查NSCs冻存复苏后的自我更新能力和分化潜能;应用免疫细胞化学方法检测NSCs在体外是否能产生运动能神经元和表达HGF受体c-Met。 84只成年雌性Wistar大鼠按损伤后1d、4d、7d、10d、14d、21d接受移植以及接受培养基移植(对照组)分为7组。细胞移植后8W对治疗大鼠的神经功能用CBS进行评分;用电生理学方法进一步检查动物的神经恢复情况;并用组织学方法(H.E.染色和神经染色)分析损伤脊髓组织的修复情况和移植细胞在损伤脊髓内的存活以及和脊髓组织的整合情况;用免疫组织化学的方法检查移植细胞的分化情况。对得到的结果进行分析并确定SCI后适合NSCs移植治疗的时间窗口后,进一步检查SCI后对应于各移植时间的脊髓组织的组织学变化,并用RT-PCR方法检测各时相点多种因子mRNA表达情况,