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背景:腹膜纤维化(peritoneal fibrosis,PF)是长期腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)治疗最重要的并发症之一。目前PF发病机制复杂,且尚无有效的治疗手段。倍半萜内酯类衍生物DMAMCL是一个安全性高、治疗窗口广、具有良好的抗炎抗纤维化效果的新型化合物。DMAMCL对PF的影响及相关机制迄今未见报道。(一)DMAMCL对PF的影响目的:从体内外两个水平探究DMAMCL对PF的影响。方法:(1)体内水平:①建立小鼠PF模型,并随机分为:正常组、PD14天组、PD28天组(即模型组)、DMAMCL早期干预组、DMAMCL延迟干预组。28天后收集标本;②通过马松染色检测壁层腹膜的厚度;Western Blot、QPCR以及免疫组织化学技术(IHC)检测腹膜Fibronectin、Collagen I、E-cadherin、α-SMA的表达水平。(2)体外水平:使用转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)干预人腹膜间皮细胞(HMrSV5),并同时给予不同浓度的MCL(DMAMCL的体内有效活性成分)刺激,Western Blot检测Fibronectin、Collagen Ⅰ、E-cadherin、α-SMA的表达水平。结果:(1)体内水平:马松染色结果显示,与模型组对比,不管是DMAMCL早期还是延迟干预组,壁层腹膜厚度都明显减轻;Western Blot、QPCR以及IHC结果显示,与模型组对比,不管是DMAMCL早期还是延迟干预组,腹膜Fibronectin、Collagen I、α-SMA的表达水平降低,而E-cadherin的表达水平升高,(2)体外水平:MCL能下调TGF-β1诱导的Fibronectin、Collagen Ⅰ、α-SMA的表达水平和上调E-cadherin的表达水平。结论:DMAMCL能从体内体外两个水平有效抑制PF。(二)DMAMCL对PF的抑制作用的机制目的:探究DMAMCL对PF的抑制作用的相关机制。方法:(1)体内水平:①建立小鼠PF模型,并随机分为:正常组、模型组、雷帕霉素(rapamycin,RAPA)溶媒(dimethyl sulfoxide,DMSO)组、RAPA组、3-Methyladenine(3MA)组、DMAMCL组、DMAMCL和 3MA联合用药组。28天后收集标本;②通过马松染色检测壁层腹膜的厚度;透射电镜检测自噬小体;Western Blot、QPCR以及IHC检测Fibronectin、Collagen Ⅰ、LC3 的表达水平。(2)体外水平:①预孵育RAPA,再使用TGF-β1干预HMrSV5细胞,Western Blot检测Fibronectin、Collagen Ⅰ、E-cadherin、LC3 的表达水平;②使用ATG7siRNA下调ATG7,进而用 MCL干预,Western Blot检测Fibronectin、Collagen Ⅰ和LC3的表达水平。结果:(1)体内水平:RAPA干预组能上调LC3-Ⅱ的表达水平,明显减轻PF;透射电镜结果显示,DMAMCL组在腹膜层找到的自噬小体明显比模型组要多;DMAMCL和3MA联合用药组和单独DMAMCL用药组对比,壁层腹膜增厚,Fibronectin、Collagen Ⅰ的表达水平升高。(2)体外水平:RAPA上调LC3-Ⅱ的表达水平后,能明显下调Fibronectin、Collagen Ⅰ的表达水平和上调E-cadherin的表达水平;下调ATG7后,Fibronectin、Collagen Ⅰ的表达明显升高,MCL的抗纤维化效果消失。结论:促进自噬,能有效抑制PF;DMAMCL能上调HMrSV5的自噬水平;DMAMCL对PF的抑制作用,很可能与其上调HMrSV5的自噬水平有关。