论文部分内容阅读
目的:研究靶向沉默RACK1基因对肺腺癌A549细胞化疗药物敏感性的影响,探讨其可能的作用机制。方法:设计并合成靶向沉默RACK1基因的sh RNA序列。实验分组为RACK1-sh RNA(实验组)、Vector-sh RNA(空载质粒组)和Control(空白对照组)三组。采用脂质体(Lipofectamine 2000)转染的实验方法,将靶向沉默RACK1基因的sh RNA序列转染至A549细胞,然后进行以下实验:(1)在荧光倒置显微镜下观察A549细胞的转染情况。(2)Western blot法检测转染后A549细胞中RACK1蛋白的表达。(3)MTT法检测转染后A549细胞对顺铂、吉西他滨、培美曲塞和紫杉醇四种不同类型化疗药物敏感性的影响。(4)Western blot法检测转染后A549细胞中肺耐药蛋白(LRP)和多药耐药蛋白(MRP)的表达。结果:1将转染24h后的A549细胞在荧光倒置显微镜下观察,在A549细胞中出现绿色荧光,说明转染成功;2转染36h后,Western blot法检测RACK1-sh RNA组RACK1蛋白的相对表达量为:0.267±0.47,明显低于Vector-sh RNA组(相对表达量为0.821±0.109)及Control组(相对表达量为0.842±0.060),与Vector-sh RNA组及Control组相比,差异有统计学意义(F=54.438,p<0.05),Vector-sh RNA组与Control组相比较,差异无统计学意义(p>0.05);3 MTT法检测示RACK1-sh RNA组细胞生长明显受到抑制,该组A549细胞对顺铂及紫杉醇的敏感性明显增加。顺铂、紫杉醇在36h、72h检测时对RACK1-sh RNA组A549细胞的抑制率显著增高,与Vector-sh RNA和Control组相比,差异有统计学意义(F顺铂36h=6.628,F紫杉醇36h=7.291,均p<0.05;F顺铂72h=7.560,F紫杉醇72h=25.132,均p<0.05);4 Western blot结果显示,RACK1-sh RNA组别A549细胞中相关耐药蛋白LRP和MRP的相对表达量为分别:0.163±0.056、0.246±0.050,与Vector-sh RNA组(0.420±0.080、0.644±0.057)及对照组(0.444±0.041、0.617±0.031)相比表达量均下降,差异有统计学意义(FLRP=19.430、FMRP=61.548,均p<0.05)。结论:靶向沉默RACK1基因可提高A549细胞对铂类和紫杉醇类化疗药物的敏感性,其作用可能是通过下调LRP及MRP的表达而实现的。