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目的研究EB病毒(Eepstein-Barr virus,EBV)潜伏期膜蛋白1(latent membrane protein 1,LMP1)对人B淋巴细胞株增殖与周期的影响、对免疫功能调节相关蛋白的调控,并初步探究其作用机制。方法(1)将LMP1序列连入pcDNA3.1-EF1a-mcs-3flag-CMV-EGFP载体,通过电穿孔法转染EBV阴性人B淋巴瘤细胞株Ramos细胞,利用遗传霉素(Geneticin,遗传G418)筛选较为稳定过表达LMP1的Ramos细胞,行RT-PCR与Western Blot检测转染pcDNA3.1-EF1a-mcs-3flag-CMV-EGFP-LMP1后Ramos细胞的LMP1表达情况。(2)利用CCK8法绘制细胞生长曲线,检测细胞增殖能力。流式细胞仪检测细胞周期分布,qRT-PCR检测促凋亡基因Bax与抑凋亡基因Bcl-2 mRNA表达。(3)Western Blot与免疫荧光法检测干扰素调节因子7(interferon regulatory factor7,IRF7)在细胞中的定量与定位,免疫共沉淀初步筛选LMP1在Ramos细胞中的相互作用蛋白。结果(1)构建了pcDNA3.1-EF1a-mcs-3flag-CMV-EGFP-LMP1载体并筛选出较稳定表达LMP1的Ramos细胞。(2)Ramos细胞稳定过表达LMP1后,细胞进入潜伏期、指数生长期的时间无明显变化,但增殖能力增强(P<0.05)。流式细胞分析结果显示:与对照组相比,LPM1过表达组G0/G1期细胞比例减少,为(20.51±1.834)%,而对照组为(26.03±0.45)%,P<0.05;G2/M期细胞比例增多(15.12±0.85)%,对照组为(8.533±1.053)%,P<0.05。促凋亡基因Bax mRNA表达无明显变化变化(1.027±0.163,P>0.05),抑凋亡基因Bcl-2 mRNA表达上调(1.46±0.111,P<0.05),Bcl-2/Bax上调(1.436±0.143,P<0.05)。(3)LMP1过表达后,IRF7在细胞内总表达量上调(1.179±0.044,P<0.05),免疫荧光显示IRF7在两组细胞核、质均有分布,分布无明显差异。免疫共沉淀结合液相二级质谱与搜库分析显示LMP1与谷胱甘肽硫转移酶(Glutathione S-transferase P,GSTP1)、核不均一核糖蛋白A1(Heterogeneous nuclear ribonucleoproteins A1,HNRNPA1)、核不均一核糖蛋白A2/B1(Heterogeneous nuclear ribonucleoproteins A2/B1,HNRNPA2B1)、核不均一核糖蛋白C1/C2(Heterogeneous nuclear ribonucleoproteins C1/C2,HNRNPC1C2)、丝氨酸/精氨酸富集剪切因子(Serine/arginine-rich splicing factor 1,SRSF1)均存在相互作用关系(Sequence coverage>30%,socre>20)。结论(1)Ramos细胞稳定过表达LMP1后,细胞进入潜伏期、指数生长期的时间无明显变化,但增殖能力增强,G0/G1期细胞比例减少,G2/M期细胞比例增多;促凋亡基因Bax mRNA表达无明显变化变化,抑凋亡基因Bcl-2 mRNA表达上调,Bcl-2/Bax上调,提示LMP1可促进Ramos细胞的增殖、影响细胞周期分布以及对凋亡相关基因具有调控作用。(2)LMP1过表达后,IRF7在细胞内分布无明显变化,总表达量上调,提示LMP1能一定程度上调IRF7的表达,并且可能通过上调IRF7表达发挥促细胞增殖作用。(3)免疫共沉淀结合液相二级质谱与搜库分析初步显示LMP1与GSTP1、HNRNPA1、HNRNPA2B1、HNRNPC1C2、SRSF1均存在相互作用关系,为进一步研究LMP1在细胞内的作用机制提供了思路。