在前期的工作中,为研究自由基在活体动物体内的分布,我们将DCFH-DA静脉注射到SD大鼠体内,发现自由基有规律地集中分布于腹白线等结缔组织中。本研究首先使用DCFH-DA与mito-SOXTM Red两种极为常用的荧光探针静脉注射入新西兰兔和食蟹猴体内,观察其自由基分布规律,进一步证实了上述发现;进而通过构建可在线粒体内表达能标记超氧阴离子的环状排列的黄色荧光蛋白(circularly permuted yellow fluorescent protein,cpYFP)的转基因动物模型--C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)来证实自由基的规律性分布,并研究线粒体与自由基的相关性和传导方式。现将主要的研究结果报告如下:1.对新西兰兔和食蟹猴静脉注射荧光染料DCFH-DA和mito-SOXTM Red后,发现自由基在其体内主要沿结缔组织分布;同时,在体视显微镜下观察结缔组织,发现其结缔组织中的胶原蛋白有强烈的荧光现象,即自由基在结缔组织中沿胶原蛋白纤维传导;2.通过构建C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)转基因小鼠模型,发现在发育期间超氧阴离子自由基主要沿其腹白线呈线性分布,并随日龄的增加逐渐向上延伸;同时,其荧光强度在每天的11:30-13:30间达到峰值;3.流经腹白线之电流导致胶原蛋白纤维显色。在以金属导线模拟代替腹白线后,野生型C57BL/6小鼠的腹白线电流在接通电路的瞬间即达到0.7μA,而转基因小鼠则是在约70分钟后才出现O.lμA的电流,此外,滴加双氧水于转基因小鼠的肝脏表面进行氧化刺激干预时,电流升至0.4μA左右;这些结果表明自由基在腹白线的传递是以电流的方式进行的,该电流来自于线粒体,与代谢相关。上述的结果初步证实了哺乳动物体内的自由基在结缔组织中以电子移动的方式传导及有规则的分布,暗示着一个由结缔组织组成的用于收集、储藏、传导和处理由线粒体泄露的电子的系统存在的可能性。