对虾白斑综合症病毒(White Spot Syndrome Virus，WSSV)自1992年引起对虾白斑病爆发以来，给全球对虾养殖业带来了毁灭性的打击。该病毒传播快，致死率高，已经给对虾养殖经济造成巨大损失。WSSV在分类学上已经被鉴定为一个新的病毒家族中的新种，同已知的病毒之间无明显同源性，因此对其感染宿主的分子机理的研究难以借鉴已知病毒的研究结果。同时由于对虾细胞系尚未成功建立，为该病毒结构、功能蛋白以及感染机制的研究造成很大困难。为此，本研究利用噬菌体展示技术的独特优点，对WSSV结构蛋白以及与感染相关对虾功能蛋白进行了研究。　　 本实验室在过去的研究中构建了抗WSSV的噬菌体展示单链抗体cDNA库，并从中筛选到了一系列能和WSSV结合的单链抗体，为了能够深入的了解WSSV表面抗原结构及其结构蛋白，揭示其致病机理，本研究分别构建了T7展示WSSVcDNA文库和M13展示WSSV基因组文库，并利用单链抗体分别对这两个文库进行“反向淘选”，筛选出单链抗体所对应的病毒抗原。由于构建T7展示WSSVcDNA文库的cDNA来源于感染了WSSV的南美白对虾，该文库中大部分cDNA为对虾的cDNA，所以此文库也可以看作是感染了WSSV的南美白对虾T7展示对虾cDNA文库　　 本研究首先利用纯化的抗WSSV单链抗体A1对T7展示WSSV cDNA文库进行淘选，筛选到了能和单链抗体A1特异结合的病毒抗原WSSV388，免疫胶体金电镜观察显示WSSV388为WSSV核衣壳蛋白。　　 本研究对另一种特异性识别WSSV的单链抗体P1A6的基本性质进行了分析，并利用该单链抗体对M13展示WSSV基因组文库进行淘选。经过两轮筛选后，得到一个能够特异和单链抗体P1A6结合的M13噬菌体，编号为B11。测序结果表明展示在噬菌体B11上的蛋白氨基酸序列与WSSV一开放阅读框WSSV217(WSSV-TW，AF440570)上的一段完全同源。　　 本研究还利用完整的WSSV病毒粒子对感染了WSSV的南美白对虾T7噬菌体展示对虾cDNA文库进行淘选，从而获得与病毒感染相关的对虾功能蛋白。经过四轮淘选得到了一个能够与WSSV病毒粒子特异结合的T7噬菌体，编号为SP4G7。由于SP4G7噬菌体与WSSV病毒粒子的结合能被对虾血细胞所影响，因此推测展示于T7噬菌体SP4G7上的外源蛋白可能代表了对虾血细胞的一个功能蛋白，并且参与了宿主细胞和WSSV病毒的相互作用。本实验为研究对虾宿主细胞与WSSV病毒相互作用提供了一种全新的试验方法。　　 在过去十多年中，对虾白斑综合症病毒(WSSV)给全世界对虾养殖业带来巨大经济损失。为了研究WSSV结构蛋白的结构和功能、病毒与宿主细胞之间的相互作用机制，本实验室在过去的研究过程中构建了抗WSSV的噬菌体展示单链抗体库，并从中筛选到了一个能和WSSV有高亲合力的单链抗体A1。A1只识别天然的WSSV，不识别变性的WSSV，表明A1只识别抗原的空间构象。虽然单链抗体A1已被用作WSSV检测，但是其对应的抗原还没有被分析出来。本研究从感染了WSSV的对虾体中提取mRNA并通过反转录PCR(RT-PCR)构建了T7展示WSSV cDNA文库。利用单链抗体A1从T7展示WSSV cDNA文库中筛选其对应的抗原。经过几轮淘选，一个展示有WSSV388部分片段的T7噬菌体明显富集。免疫胶体金电镜观察显示WSSV388为WSSV核衣壳蛋白。本研究表明可以利用这种“反向淘选”的方法从噬菌体展示文库中筛选单链抗体对应的抗原。　　 本实验将对虾白斑综合症病毒(White spot syndromevirus，WSSV)基因组通过三种限制性酶酶切后连接到改造过的噬菌粒载体pCANTAB5E中，成功的构建了M13噬菌体展示WSSV基因组文库，并将其运用到抗WSSV单链抗体对应抗原的筛选当中。利用一种特异性识别WSSV的单链抗体P1A6对噬菌体展示基因组文库进行淘选，经过两轮筛选后，得到一个能够特异和单链抗体P1A6结合的M13噬菌体，编号为B11。测序结果表明展示在噬菌体B11上的蛋白氨基酸序列与WSSV一开放阅读框WSSV217(WSSV-TW，AF440570)上的一段完全同源。本研究结果表明，噬菌体展示基因组文库也可以用来筛选抗体对应的抗原，这将有助于进一步研究WSSV结构蛋白的功能，揭示WSSV与抗体或宿主结合机理。　　 为了研究对虾白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus，WSSV)感染机制，揭示其病毒与宿主细胞相互作用机理，本实验利用完整的WSSV病毒粒子对感染了WSSV的南美白对虾T7噬菌体展示对虾cDNA文库进行淘选。经过四轮淘选后，通过ELISA鉴定阳性克隆，得到了一个能够与WSSV病毒粒子特异结合的T7噬菌体，编号为SP4G7。由于SP4G7噬菌体与WSSV病毒粒子的结合能被对虾血细胞所影响，因此推测展示于T7噬菌体SP4G7上的外源蛋白可能代表了对虾血细胞的一个功能蛋白，并且参与了宿主细胞和WSSV病毒的相互作用。本实验为研究对虾宿主细胞与WSSV病毒相互作用提供了一种全新的试验方法。