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目的:观察黄芪甲苷(AstragalosideⅣ,AST)对高糖腹透液作用下HPMCs细胞活性、紧密连接ZO-1的表达、细胞因子(TGF-β1、CTGF、VEGF)的分泌及活性氧(ROS)产生的变化,探讨黄芪甲苷对HPMCs紧密连接ZO-1的影响与机制。 方法:采用10%FBS-RPMI1640培养液于37℃、5%CO2培养箱中培养人腹膜间皮细胞株(HMrSV5),根据实验目的及要求进行分组:空白对照组(10%FBS培养液2mL),模型组(4.25%PDS1mL和10%FBS培养液1mL),不同浓度的黄芪甲苷组:分别含AST(0、10、20、30、40、50μg/mL)的4.25% PDS1mL和10%FBS1mL培养液。MTT法检测细胞活性;Western blot法检测ZO-1的表达;ELISA法检测细胞上清液中TGF-β1、CTGF、VEGF;运用活性氧阴离子荧光探针装载细胞在多功能酶标仪下检测细胞内产生ROS。 结果:①采用不同浓度的PDS刺激HPMCs12、24、48h后,各组细胞吸光值均随刺激时间延长而下降,差异有统计学意义(P<0.05);组间比较,各时间点随PDS浓度增高吸光值降低,差异有统计学意义(P<0.05),其中模型组48h吸光值最低;4.25%PDS刺激HPMCs48h,给予不同浓度AST干预后,与未加药组比较,40、50μg/mL浓度组吸光值明显升高(P<0.05);②采用4.25%PDS刺激HPMCs6、12、24、36、48h后,随刺激时间延长ZO-1表达减弱,组内差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,模型组ZO-1表达随着刺激时间延长而减弱,组间差别有统计学意义(P<0.05)。4.25%PDS刺激HPMCs48h,给予不同浓度AST干预后,ZO-1的表达,随AST浓度增加而增强,各浓度组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。③空白对照组24、48h细胞上清液TGF-β1、CTGF、VEGF的含量较低;模型组较空白对照组上升(P<0.05);不同浓度AST干预后,TGF-β1各剂量组均较模型组下降,其中以48h的AST中剂量下降较为明显;48h的CTGF高、中剂量与低剂量组较模型组下降,VEGF高、中剂量组较模型组下降,两者均以高剂量组下降幅度更为显著(P<0.05)。④模型组HPMCs内ROS较对照组显著升高,AST单独处理组HPMCs内ROS亦较对照组升高,但升高幅度不如模型组,能对抗高糖PDS导致的ROS升高,AST治疗组与各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。 结论:1、高糖腹透液可降低HPMCs的细胞活性,呈浓度及时间依赖性;高糖腹透液可减弱HPMCs表达紧密连接ZO-1;2、AST可明显提高高糖腹透液作用下HPMCs细胞活性,增强紧密连接ZO-1的表达,呈时间依赖性。3、高糖腹透液可减弱HPMCs分泌细胞因子(TGF-β1、CTGF、VEGF)。AST可降低HPMCs分泌TGF-β1、CTGF、VEGF。AST能够调节高糖腹透液诱导的HPMCs表达紧密连接ZO-1,其作用与AST对抗ROS,以及通过影响TGF-β1、CTGF、VEGF等细胞因子,抑制了EMT的发生有关。