【摘 要】
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研究目的本研究的目的在于探究阿帕替尼对骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭能力的影响及其作用机制。研究方法本次实验根据药物浓度设计7个组:阿帕替尼浓度分别为0μmol/L、0.1μmol/L、0.5μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L,分别对应标记MG63-00、MG63-0.1、MG63-0.5、MG63-1、MG63-5、MG63-10、MG63-20。用相
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研究目的本研究的目的在于探究阿帕替尼对骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭能力的影响及其作用机制。研究方法本次实验根据药物浓度设计7个组:阿帕替尼浓度分别为0μmol/L、0.1μmol/L、0.5μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L,分别对应标记MG63-00、MG63-0.1、MG63-0.5、MG63-1、MG63-5、MG63-10、MG63-20。用相应浓度的阿帕替尼处理MG63细胞,分别于阿帕替尼作用0h、24h、48h、72h后利用MTT法测定细胞增殖能力,利用迁移、侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力,利用统计学软件Graph Pad Prism8进行单因素方差分析以及绘图,用RT-PCR进行MMP-9、VEGF、P53基因表达检测,用Western印迹试验测定其蛋白水平。研究结果1.通过MTT法检测阿帕替尼对骨肉瘤细胞增殖的影响,发现随着阿帕替尼药物浓度的升高以及阿帕替尼处理时间的延长,其对骨肉瘤细胞具有的抑制作用逐渐增强,经过单因素方差分析,在同一浓度之下,随着阿帕替尼药物干预时间的增加,抑制率增加,差异具有显著性（P<0.05）,在同一时间点,随着阿帕替尼药物浓度的增加,MG-63细胞株抑制率增高,差异具有显著性差异（P<0.05）,说明阿帕替尼具有明显的抑制骨肉瘤细胞的增殖作用,且具有浓度依赖性。2.选择阿帕替尼干扰MG63骨肉瘤细胞株48小时之后,利用Excel软件绘制相关的量效关系图,将细胞抑制率作为纵坐标,而阿帕替尼的浓度作为横坐标,利用软件做出曲线图,曲线图得出回归方程y=11.44x-21.634,相关系数为R2=0.8893,P<0.05,表明相关回归系数方程有意义,根据推算得出阿帕替尼干预48小时之后,骨肉瘤细胞增殖的IC 50为6.26μmol/L.3.细胞迁移实验--划痕试验检测阿帕替尼对MG63骨肉瘤细胞株的迁移能力的影响。利用单因素分析比较几组不同浓度阿帕替尼组之间的差异。随着阿帕替尼浓度的增加,细胞株的迁移能力明显减弱,而随着处理时间的增加,每组细胞株的迁移能力也相应逐渐减弱。4.利用Transwell实验检测阿帕替尼对MG63骨肉瘤细胞株的侵袭能力的影响,利用单因素方差分析比较几组不同浓度阿帕替尼之间的差异,F=17.203,P<0.05,差异具有统计学意义,提示随着阿帕替尼浓度的增加,细胞株的侵袭能力减弱。而随着处理的时间增加,阿帕替尼的侵袭能力逐渐减弱,P<0.05,差异具有统计学意义。5.用阿帕替尼处理骨肉瘤细胞后,RT-PCR检测提示MMP-9、VEGF基因表达降低,P53升高。Western印迹试验测定显示MMP-9、VEGF表达水平减低,P53升高,且MMP-9、VEGF所测指标水平与药物浓度呈反比。研究结论阿帕替尼具有明显抑制MG63细胞株增殖以及侵袭迁移的作用,且随着阿帕替尼作用的浓度以及时间的延长其抑制作用增强。而关于阿帕替尼抑制骨肉瘤的作用机制可能是阿帕替尼抑制了VEGF和MMP9的分泌,是否还通过其他作用机制,需要进一步研究。
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