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前言 5羟色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT），又称血清素，是一种重要的生物胺。它在人体中既是中枢神经递质也是外周调质，参与许多重要的生理和病理过程，而这些功能都是5-HT通过与细胞表面相应的特异性受体结合实现的。到目前为止，在哺乳动物中已发现14个5-HT受体（5-HTR）亚型，7个亚家族，即5-HT1R～5-HT7R。其中，5-HT2R又分为5-HT2AR、5-HT2BR和5-HT2CR三个亚型。5-HT2BR是5-HT2R家族中与5-HT亲合力最高的亚型。5-HT2BR在人的中枢神经系统和一些外周组织中均有表达，但至今尚未见该受体在膀胱细胞表达的相关报道。为探讨5-HT2BR在动物膀胱细胞有否表达，我们应用半定量RT-PCR技术对正常大鼠的膀胱组织进行了检测。同时探讨了与5-HT作用有关的药物吡喹酮、褪黑激素和右芬氟拉明及致癌剂联苯胺对大鼠膀胱细胞5-HT2BR表达的影响。在此基础上，我们还对临床膀胱癌病人的肿瘤组织及癌旁正常组织的5-HT2BR表达水平进行了检测，观察了膀胱细胞癌变时该受体表达水平的变化，以了解膀胱癌的发生与5-HT2BR是否有关。 实验材料与方法 1．实验材料 1．1 实验动物：雄性Wistar大鼠28只，体重200±10g。 1．2 临床标本：临床确诊为膀胱癌的病人癌组织标本32份，癌旁正常膀胱组织标本8份。 1．3 主要药品及试剂：RNeasy Mini Kit，oligo dT（16），Nucleaseree wate，RNase inhthitor，dATP，dGTP，dCfP，dTYP，Taq DNA聚合酶，M－MuLV逆转录酶，联苯胺(behdrie入毗＠M(PnqU－antel入褪黑激素(melatonin入右芬氟拉明(deMeLPBS缓冲液hffi．4入 二．4主要实验仪器：UV300紫外H中光光度计，IIH－4数显恒温水浴锅，HH·WZI·600电热恒温水温箱，HHWI·Cu600电热恒温水温箱，NC－200 Pelher Thermal CyCle，GDS8000凝胶成像及分析系统。 2．实验方法 2．l实验动物分组与药物处理：雄性WSfor大鼠28只，随机分为7组，每组4只。实验组分别用毗嗟酮、褪黑激素、右芬氟拉明及联苯胺处理。用相同容量的玉米油、生理盐水及20％乙醇以同样方式处理作为对照。给药二小时后处死大鼠，于无菌条件下取出膀耽，制备成细胞浓度为 5 X 10‘什ml的 细胞悬液。 2．ZI＄床标本处理：临床病人的膀眺癌及癌旁正常膀耽组织标本手术切除后迅速置于冰上带回实验室。制备成细胞浓度为5X10‘什ml的单个细胞悬液。 2．3膀耽细胞总 RNA提取：取 lml膀肮纫胞单个纲胞悬液，按试剂盒说明提取总RNA。用UV300紫外分光光度计测定总RNA的纯度及浓度。 2．4 RT－PCR：以总RNA为模板合成第一链CDNA，取每种cDNA为模板，以管家基因p－achn为内参照扩增5－HT。R及p．acds基因。 2．5 PCR扩增产物检测与分析：PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和滨化乙锭染色，然后用 GDS8删凝胶成像仪和 GelwhlD软件系统进行分析。5－HT人表达水平用所测定的 5－HT人扩增产物的电泳条带密度与p－actin电泳条带密度的比值来表示。 2．6统计学处理：用 w 10．0 for wn恤软件对结果中的数 ·2·徽行统计学处理，实验数据以i钻表示，用t检验进行显著性分析。 实验结果 实验动物膀肮细胞 5－BTF表达检测结果显示，实验组和对照组大鼠膀腕细胞均有5－HT人表达。毗嚎酮、褪黑激素和右芬氟拉明处理组的5－BT。R平均表达水平明显高于生理盐水处理组门正常对照组＊毗唉酮和右芬氟拉明处理组与其溶剂处理组相比有显著性差异，联苯胺处理组与其溶剂处理组相比未见显著性差异，玉米油处理组与生舰水处理组相比有显著性差异，20％乙酗理组与生舰水处理组相比末见显著性差异。 临床标本膀M＄胞 5－HT。R表达检测结果显示 28．13％的膀腕肿瘤细胞有5－HTF表达，癌旁正常组织细胞 5－HT人表达率为50％。两者的平均表达水平略有不同但无显著性差异汀＞o．仍人4腿示5一趴o阳性表达的癌旁正常组织标本所对应的临床患者膀肮癌组织砚中有2份显示5－HTo阳性表达，二者平均表达水平不同。 讨 论 据文献报道，5－HT。R在生物体的神经系统、循环系统、消化系统及泌尿系统组织中有表达。但到目前为止，对泌尿系统组织细胞 5－HT人表达检测的报道仅显示了该受体在肾及输尿管有表达。我们在本鹏中用RT－PCR方法对正常和药物处理过的大鼠和临床膀肮癌及癌旁正常组织细胞进行了检测，结果显示上述动物及人膀肮细胞均有5－HTo表达，提示该受体在膀腕组织中可能有潜在生理功能。受体是细胞在进化过程中逐渐表达于细胞表面的蛋白组分。它虽是遗传获得的固有蛋白，但并不是固定不变的，总是处于动态平衡状态。我们用与5－HT作用有关的 ·3·药物毗噎酮、褪黑激素及右芬氟拉明对实验动物大鼠腹腔注射进行刺激，经半定量RT—PCR检测，结果显示这些药物对大鼠膀耽细?