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目的本实验旨在研究三七的主要成分三七皂苷单体体外对成骨细胞的影响,探讨三七皂苷单体的成骨作用机理。方法将成骨前体细胞MC3T3-E1培养于含有10%FBS(Gibco TM Invitrogen)的α-MEM培养基中,通过在各培养孔中加入不同种类不同浓度的三七皂苷单体来研究三七皂苷单体体外对成骨细胞的影响,检测指标为:用荧光定量法检测细胞增殖情况;用比色法检测细胞成骨分化碱性磷酸酶(ALP)活性;通过酶联免疫吸附(ELISA)检测各组细胞培养基中的OCN含量;用茜素红染色观察并计量细胞矿化培养后的基质外矿化结节面积;用实时荧光定量RT-PCR检测,并以管家基因β-actin的表达水平为内参照,对各基因表达水平进行校准。结果1、三七皂苷单体在50mg/L浓度时显著促进细胞增殖,浓度增加反而效果下降,超过100mg/L有抑制细胞增殖的作用;2、三七皂苷单体在50mg/L浓度时即可显著促进ALP活性,随着浓度的升高达到平台期后下降,1000mg/L时抑制ALP表达;3、早期三七皂苷单体上调OCN表达并无显著差异,只有1000mg/L浓度时有明显提高,三七皂苷单体上调OCN表达量随着浓度递增(5-1000mg/L)而递增;4、在茜素红矿化结节染色面积的比较中发现三七皂苷单体在1000 mg/L浓度诱导的矿化结节面积最大,空白组无矿化出现,三七皂苷单体在28d时诱导的矿化面积是21d时的近3倍;5、三七皂苷单体在5-1000mg/L的检测浓度范围内,各基因表达水平的比较上:(1)三七皂苷单体上调细胞ALP基因表达的浓度效应关系呈现钟形曲线,50mg/L浓度左右达到最高峰;(2)三七皂苷单体上调OCN基因表达随着浓度而显著增长;(3)三七皂苷单体上调COL1基因表达的幅度在4d随着诱导时间而增加,三七皂苷单体的浓度效应关系呈现近似钟形曲线,高峰值仍在50mg/L时达到;(4)4d时,三七皂苷单体浓度50mg/L时,Runx2基因表达水平显著高于其余组,在随着诱导时间的增长到7d时总体表达量较4d时并无显著差异,然而7天时200mg/L浓度时效果最为显著。结论三七皂苷单体早期显著促进成骨细胞增殖,随着浓度的增加并逐渐增加;低浓度三七皂苷单体可以促进成骨细胞的ALP活性;随三七皂苷单体浓度增加和时间延长,细胞外基质矿化结节面积有增大趋势;三七皂苷单体在5-1000mg/L浓度范围内,三七皂苷单体上调OCN基因表达量随着浓度递增,三七皂苷单体上调COL1基因表达的幅度也随着诱导时间而增加,Runx2基因表达水平7d时总体表达量较4d时并无明显差异。