银杏种仁抑菌蛋白的提取分离及抑菌性研究

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银杏(Ginkgo biloba)对植物病原菌的侵染有很强的抵抗力,银杏各组织中的抑菌成分不断被发现。为了进一步研究银杏种仁中抑菌蛋白的性质,本研究从银杏种仁中分离纯化抑菌蛋白,并以食品中的腐败菌和食源性致病菌为考察对象,对银杏种仁蛋白的抑菌活性及其稳定性进行研究。主要结论如下:(1)通过单因素试验及正交试验优化银杏种仁粗蛋白提取工艺,比较了Tris-HCl法和磷酸缓冲液法对银杏种仁粗蛋白的提取效果。SDS-PAGE结果表明,采用磷酸缓冲液法获得银杏种仁粗蛋白条带最多,其提取最佳工艺参数为:料液比1︰20(g/mL)、提取时间12h、提取液浓度为0.05mol/L、提取液pH值为7.0,此时银杏种仁粗蛋白的提取率达到最高,达到90.67%。(2)通过40%和80%饱和度硫酸铵分级沉淀,去除水溶性杂质和杂蛋白,获得初步纯化的银杏种仁抑菌粗蛋白利用DEAE-Cellulose52离子交换层析对银杏种仁抑菌粗蛋白进行分离,上样浓度10mg/mL,上样量10mL,洗脱液流速为5mL/min,用含0.1mol/L(170mL)-0.3mol/L(80mL)-0.8mol/L(270mL)NaCl的0.02mol/L PBS(pH7.0)缓冲液进行阶段式洗脱,银杏种仁抑菌粗蛋白被分为了3个组分:峰1、峰2、峰3。抑菌活性检测发现峰2对细菌及真菌的抑菌活性均较弱,峰1的抑菌活性显著强于峰3。(3)以7种细菌及5种真菌为指示菌,对银杏种仁抑菌蛋白进行抑菌活性研究。结果表明,峰1的抑菌活性最强,对肺炎克雷伯氏菌、金黄色葡萄球菌,戴尔有孢圆酵母菌及黑曲霉均表现为极敏。酸碱度显著影响银杏种仁抑菌蛋白峰1的抑菌能力,在pH6.0~8.0之间峰1抑菌活性最好。加热显著降低峰1的抑菌活性。对银杏种仁抑菌蛋白峰1的稳定性进行了研究。结果表明,溶液中pH值影响银杏种仁抑菌蛋白的稳定性,其在pH4.0的溶液中溶解度最低。NaCl浓度为0~6%时,银杏种仁抑菌蛋白的溶解度较高,性质稳定。银杏种仁抑菌蛋白对热不稳定,温度的变化会显著影响其性质的稳定性。
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