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采用RT-PCR技术，在HCMV(AD169)感染的人胚肺成纤维细胞中检测到了HCMVUL49mRNA，因而首次在RNA水平证实HCMV UL49基因的表达。此外，进一步检测不同感染时间(1h、5h、9h、12h、24h、48h和72h)受染细胞中UL49mRNA的表达情况，初步判断UL49并非即刻早期表达基因(IE)，而可能是一个早期(β2)表达基因。 根据HCMV UL49mRNA的序列，借助计算机软件模拟，设计了一组针对HCMV UL49mRNA不同靶位的EGS(共8个，分别命名为EGS1～EGS8)，以此作为筛选库。通过胞外初筛、胞内复筛和胞内抗病毒活性的检测，拟从中筛选出具有抗病毒活性的EGS。1)胞外初筛：首先从HeLa细胞中提取具体外切割活性的RNase P，并以此建立了一种EGS胞外筛选系统。通过该系统证实，所设计的八个EGS中，有六个EGS具有靶向引导切割活性，它们分别是EGS1、EGS3、EGS4、EGS5、EGS6和EGS7，其余的EGS2和EGS8则无明显活性。在具活性的六个EGS中，各EGS的靶向引导切割效率有所不同。其中EGS1、EGS3、EG6和EGS7四个EGS的活性较强，靶向引导切割的效率均超过50％；而EGS4和EGS5的靶向引导切割效率则均低于50％。2)胞内复筛中：首先将UL49基因克隆至pGEFP-N1质粒绿色荧光蛋白基因的上游，以构建UL49-绿色荧光蛋白融合表达载体(pUL49／EGFP-N1)。将EGS与该融合蛋白表达载体以脂质体共转染HeLa细胞(同时以红色荧光质粒pDsRed2-C1，作为转染的内对照)，建立了一种有效的EGS胞内复筛系统。通过荧光显微观察、Typhoon扫描及流式细胞仪检测，证实胞外初筛中活性较强的四个EGS中，只有EGS1、EGS3和EGS6具有明显的胞内靶向抑制活性，而EGS7的活性则较弱。3)胞内抗病毒活性的检测：将初筛及复筛证实有效的EGS分别以脂质体转染HELF细胞，然后再以AD169病毒株感染。在感染24h、48h和72h后，抽提感染细胞的总RNA，以相对荧光定量PCR(β-actin作内参)检测其中HCMVUL49mRNA的含量。结果表明：EGS1、EGS3、EGS6和EGS7对HCMV UL49mRNA表达的抑制率分别为74.87±2.85％、17.85±4.16％、89.77±0.91％和35.40±1.92％。其中，EGS1和EGS6的靶向抑制活性明显高于其余两个EGS(P＜0.01)。进一步以EGS1和EGS6作为研究对象，通过绝对荧光定量PCR的方法检测EGS转染后病毒培养液中HCMV基因组DNA的变化，以此评价EGS1及EGS6对胞内HCMV复制的抑制活性。结果显示，E6S1和EGS6转染后，病毒的增殖曲线均明显低于未转染EGS的对照组。从而证实了EGS1和EGS6在胞内的抗病毒效应。其中，EGS6的抑制作用较强(抑制率为89.62±2.55％～95.9±1.98％)，EGS1的抑制作用则相对较弱(抑制率为40.25±1.05％～70.85±2.03％)。 总之，通过本研究一系列的筛选步骤，获得两种具有胞内抗HCMV活性的EGS序列(EGS1和EGS6)，从而为新型抗HCMV反义药物的进一步研究与开发奠定了基础。