论文部分内容阅读
第一部分LPC损伤的HUVE-12细胞对MΦ 增殖、迁移及形成泡沫细胞的影响目的:研究溶血磷脂酰胆碱(lyso-Phosphatidylcholine,LPC)能否损伤人脐静脉内皮细胞系细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVE-12),对人单核细胞(human acute monocytic leukemia cell line,THP-1)源性巨噬细胞(macrophages,MΦ)增殖、迁移、形成泡沫细胞的影响。方法:1、用LPC诱导氧化损伤HUVE-12,制备氧化应激损伤内皮细胞模型;用Transwell制备氧化应激损伤的HUVE-12与THP-1源性MΦ共培养的模型。2、用MTT法、划痕实验法、油红O染色法和总胆固醇含量测定分别检测损伤的HUVE-12对THP-1源性MΦ增殖、迁移形成泡沫细胞的影响,Western Blot 检测 HUVE-12 细胞 TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白的表达水平。结果:随着LPC浓度增加,HUVE-12活性氧的产生、LDH的含量都增加,LPC损伤HUVE-12上调共培养系统中HUVE-12细胞TLR4、Myd88、NF-kBp65表达和共培养条件培养基IL-1β的含量,促进共培养系统中MΦ增殖、迁移、形成泡沫细胞。第二部分DFMG干预LPC损伤HUVE-12细胞对MΦ 增殖、迁移及形成泡沫细胞的影响目的:研究活性新化学实体,7-二氟甲氧基-5,4’-二甲氧基金雀异黄素(7-difluoromethoxy-5,4’-dimethoxygenistein,DFMG)是否抑制 LPC氧化损伤HUVE-12细胞对THP-1源性MΦ增殖、迁移及形成泡沫细胞的促进作用。方法:用MTT法、划痕实验、油红O染色法和总胆固醇含量测定检测浓度梯度DFMG对LPC损伤HUVE-12诱导THP-1源性MΦ增殖、迁移、形成泡沫细胞的影响,Western Blot检测HUVE-12细胞TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白的表达水平。结果:DFMG降低共培养条件培养基的IL-1β含量以及下调共培养系统中HUVE-12细胞TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白表达,抑制共培养系统中THP-1源性MΦ增殖、迁移、形成泡沫细胞。第三部分DFMG调节TLR4信号通路对LPC损伤HUVE-12细胞诱导MΦ增殖、迁移及形成泡沫细胞的影响目的:研究DFMG抑制氧化损伤的HUVE-12促进THP-1源性MΦ增殖、迁移、形成泡沫细胞的作用是否涉及调控HUVE-12细胞的TLR4信号通路。方法:用MTT法、划痕实验、油红O染色法和总胆固醇含量测定检测TLR4特异性拮抗剂(CLI-095)、TLR4特异性激动剂(Lipopolysaccharides,LPS)、白介素-1受体特异性拮抗剂(Interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra)和 DFMG 对 LPC 损伤HUVE-12诱导THP-1源性MΦ增殖、迁移、形成泡沫细胞,western blot检测HUVE-12细胞TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白的表达水平。结果:CLI-095、IL-1Ra、DFMG均能降低共培养条件培养基的IL-1β含量和下调共培养系统中HUVE-12细胞TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白的表达,抑制共培养系统中THP-1源性MΦ增殖、迁移、形成泡沫细胞。LPS增加共培养条件培养基的IL-1β含量和上调共培养系统中HUVE-12细胞TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白的表达,促进共培养系统中THP-1源性MΦ增殖、迁移、形成泡沫细胞。结论:1.在transwell共培养基系统中,LPC损伤HUVE-12促进MΦ增殖、迁移、形成泡沫细胞。2.DFMG抑制LPC损伤HUVE-12促进MΦ增殖、迁移、形成泡沫细胞作用。3.DFMG抑制LPC损伤HUVE-12促进MΦ增殖、迁移、形成泡沫细胞作用与其HUVE-12细胞的TLR4信号通路相关。