多肽基荧光生物传感器的构建及其应用研究

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本论文以多肽功能化纳米材料基荧光生物传感器的研究为背景,通过设计、合成特定序列的肽链,考察了多肽与纳米材料的作用机理,并应用于蛋白酶的分析检测。具体内容如下:首先,综述了荧光生物传感器及多肽的特点和研究进展。归纳总结了目前利用多肽与生物分子结合的作用机理,重点分析了多肽在蛋白酶荧光传感器方面的应用进展,阐述了论文内容并提出工作设想。其次,以巯基丙酸为修饰剂制备水溶性CdTe量子点,对其光谱性质和形貌等进行了表征。首次设计了一条新颖而独特的肽链,使其既可以与水溶性半导体纳米晶体结合,诱导其聚集,又可以被胰蛋白酶水解。构建了一个简单、无标记、灵敏的检测胰蛋白酶的荧光turn-on传感器,而且可实现在紫外灯下的裸眼检测。其最低检测限可达20ng/mL。再次,通过对上述工作的总结,我们发现在实际应用中,多路复用和高通量测定蛋白酶活性的简单方法对于快速医疗诊断更具有实际价值。于是利用FAM(5-羧基荧光素)标记肽诱导的量子点聚集机制,构建了一个FAM-肽-QDs基多路复用荧光传感器来用荧光仪或裸眼监测胰蛋白酶和胶原酶的活性。该传感器实现了以单个肽底物检测两种酶,更加扩展了多路复用蛋白酶传感器的应用效率。方法简单易行,对于胰蛋白酶和胶原酶检测的线性范围分别为0.75μg/mL到15μg/mL和5μg/mL到50μg/mL,而最低检测限可分别达到0.2μg/mL和1μg/mL。最后,利用石墨烯大的比表面积,好的水溶性和生物相容性的特点,构建了多肽-氧化石墨烯基新型荧光生物传感器用于高灵敏的检测胶原酶活性。该方法检测胶原酶的线性范围可从0.5μg/mL跨至40μg/mL,接近两个数量级,而最低检测限可达0.2μg/mL。
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