目的：探讨沉默MMS2和REV3基因表达对人耐药性结肠癌细胞（THC8307/L-OHP）耐药逆转的影响。　　方法：以人高分化耐奥沙利铂结肠癌细胞（THC8307/L-OHP）为实验材料，采用脂质体-质粒转染技术构建带有干扰目的基因MMS2和REV3的miRNA片段和携带绿色荧光蛋白标记的重组质粒（pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-MMS2和pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-REV3）的细胞系，通过实时荧光定量PCR（real-time fluorescent quantitative PCR，qRT-PCR）和免疫荧光技术（immunostaining technique）检测该细胞系干扰效率，选择MMS2和REV3低表达具有统计学意义的上述细胞系作为实验组细胞，同时将未曾作过处理的THC8307/L-OHP细胞作为空白对照组，转染绿色荧光蛋白空质粒（pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR）的THC8307/L-OHP细胞作为阴性对照组，分别转染单基因miRNA片段和携带绿色荧光蛋白标记的重组质粒为实验对照组；应用噻唑蓝比色分析实验（MTT）、罗丹明123实验、流式细胞术检测实验组和对照组细胞对L-OHP药物敏感度、细胞凋亡变化。　　结果：MMS2基因在THC8307/L-OHP中的表达量显著高于敏感细胞株THC8307（P＜0.05)。实验组细胞MMS2和REV3基因表达被成功抑制，与对照组相比，实验组细胞的L-OHP半数抑制浓度(half inhibition concentration，IC50)及耐药指数（resistance index，RI）减低(P＜0.05)，且经L-OHP处理后，其凋亡率显著增高(P＜0.05)。同一细胞同时导入2个不同的miRNA质粒载体序列不会相互干扰对方的基因表达和沉默效应变化。　　结论：下调MMS2和REV3基因可逆转人结肠癌细胞对L-OHP的耐药性并促进肿瘤细胞凋亡，且MMS2和REV3双基因共沉默抑制耐药性结肠癌细胞增殖和诱导凋亡的作用强于单基因沉默载体。