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本课题通过体外实验探讨超声造影剂增强超声辐照对增加血管内皮细胞膜通透性的可能性,以及介导基因转染的可行性;构建和介导含KDR启动子重组真核表达质粒转染血管内皮细胞,观测单纯疱疹病毒Ⅰ型的胸腺激酶基因(HSV-TK)/更昔洛韦(GCV)特异性杀伤血管内皮细胞的有效性。在此基础上建立动物肝癌模型,观测超声造影剂在超声辐照下对肝癌血管内皮细胞膜及微循环通透性的影响,为建立超声造影剂增强超声辐照介导的肝癌基因治疗新模式奠定初步实验基础。本文主要研究以下几部分:第一部分人脐静脉血管内皮细胞分离、培养及鉴定;第二部分超声造影剂对超声辐照下血管内皮细胞膜通透性作用的影响;第三部分造影剂对超声辐照介导绿色荧光蛋白质粒转染血管内皮细胞的影响;第四部分HSV-TK/GCV体外杀伤血管内皮细胞;第五部分超声辐照联合造影剂对小鼠肝癌微血管通透性的作用。
结论:1.所建立的人脐静脉血管内皮细胞体外培养方法具有成功率高和比较可靠的优点。2.超声辐照可增加培养的血管内皮细胞膜的通透性,超声造影剂可显著地增强超声辐照的作用。3.超声造影剂SonoVue能显著增强超声辐照介导的绿色荧光蛋白报告质粒转染血管内皮细胞的效率;超声辐照联合造影剂能有效地介导含KDR-TK真核表达质粒转染血管内皮细胞。4.超声辐照联合造影剂介导的含KDR启动子基因可调控HSV-TK/GCV对血管内皮细胞的特异性杀伤作用。5.超声辐照联合超声造影剂可增加小鼠肝癌组织的微血管壁的通透性。