脂多糖（LPS）是革兰氏阴性菌外膜的主要组成部分，小剂量的LPS即可引起广泛的生物学反应。临床上约65％败血症是由革兰氏阴性菌引起的，死亡率达22.7％～40％。长期以来，临床实验诊断内毒素血症多采用鲎试验法（LT），由于鲎试剂自身的非特异性及血浆中诸多因素的影响，尽管多年来进行了许多改进，特异性仍不能令人满意。ELISA方法是临床实验诊断中应用最为广泛的方法之一，但在内毒素检测方面，虽有少数文献报道，但由于结果不满意而未能实际应用，其主要的原因是难以获得具有广泛交叉反应性的内毒素单抗；其次，内毒素包被微板比较困难。本研究是利用本科研制的两株具有广泛交叉反应性的内毒素单抗探索合适条件，首次建立检测内毒素的双抗体夹心ELISA方法，旨在为临床提供一个简单快速、特异性强、敏感性高的内毒素检测方法。 本研究的内容主要有三部分： 一 1．杂交瘤细胞腹水产生影响因素的观察 为了获得大量的杂交瘤腹水，我们对预处理小鼠的佐剂种类。 小鼠类型和杂交瘤细胞系等因素对腹水产生的影响进行了观察。 结果：①用降植烷与福氏不完全佐剂预处理小鼠比液体石腊效果 显著，前者不但腹水产生的快，而且量也多（P＜0．0引；②经产雌 鼠比未产仔鼠的腹水产量明显增多，而未产仔雌鼠与雄鼠之间腹 水产量无明显差异；③C3AZ杂交瘤株的腹水产量比H3D3的多，但 二者差异不明显（P＞0刀5）。 2。两株单抗对不同种属细菌的LPS交叉反应谱的确认 LPS单抗对不同种属细菌的LPS是否具有广泛的交叉反应性 是建立检测内毒素双抗体夹心ELISA方法的基础和关键。为此， 我们收集了 ZI属 48种细菌，用 l旬接 ELISA法和 PHA法对两株单 抗进行了交叉反应谱的检测。其结果为：两株单抗对肠杆菌科细 菌汐埃希氏菌属。肠杆菌属、克雷伯菌属、变形杆菌属等）交叉反 应性最强，对非发酵糖的革兰阴性细菌怕不动杆菌属、假单胞 菌属、产碱杆菌属等）交叉反应性相对较弱，而对念珠菌属的交 叉反应性与非发酵糖的细菌相似，对革兰氏阳性球菌不引起交叉 反应，ELISA法和 PHA法的交叉反应性结果基本一致。C3AZ单抗 虽比H刃3单抗的交叉反应性高，而二株单抗的反应广谱性基本一 致，证实了用 LPS－HDL作抗原筛选出的两株广谱性抗 LPS MCAb 可作为检测工PS的抗体应用。 3．内毒素检测的双抗体夹心 ELISA方法的建立和初步应用 根据文献。我们在探讨了紫外线照射微孔板与否、洗涤液和抗 体稀释液的种类。封闭液的种类等对结果影响的基础上，建立了 检测内毒素的双抗体夹心ELISA法。对该法的敏感性、特异性、 准确性和重复性等进行了实验，并初步检测了40份临床标本。实 －4－一 验结果表明，该法的敏感性最低可检出50pg／hl的LPS，优于鲨试 验定性法及所有文献报道的间接ELISA法，虽较定量鲨试剂仪器 比浊法（敏感性为lp咖1）低，但其特异性优于鲨试验定性法和 仪器比浊法，且重复性和准确性好。 本实验首次建立了内毒素检测的双抗体夹心ELISA法，实验 结果表明该法在临床内毒素检测中将会有广泛的应用前景。虽然 其敏感性高于所有文献己报道的检测内毒素的间接ELISA方法， 但尚须进一步提高。