目的:探究高尔基体重组与堆叠蛋白65(GRASP65)通过JNK信号通路对MKN-45增殖、凋亡、周期和侵袭的影响。方法:用免疫印迹和免疫荧光法检测三种细胞中GRASP65的表达,筛选出GRASP65高表达的细胞株。将si RNA转染至GRASP65高表达的胃癌细胞株以降低GRASP65蛋白的表达。使用Western印迹和RT-q PCR筛选出最佳的si RNA基因敲除片段,用于后续实验。将胃癌细胞中GRASP65的表达降低后再在各实验组中加入JNK信号通路抑制剂SP600125。实验共分为四组:敲低加抑制剂组(SI-1565+SP6组)、敲低组(SI-1565组)、对照加抑制剂组(SI-NC+SP6组)、对照组(SI-NC组)。细胞增殖能力用cell counting kit 8试剂盒检测,采用FCM检测四组的凋亡和周期。四组细胞的侵袭能力用Transwell检测。使用蛋白质印迹法检测每组细胞中GRASP65,P21,caspase3和其他蛋白质的表达。结果:蛋白印迹及免疫荧光结果显示MKN-45细胞中GRASP65高表达。Western blot及RT-q PCR结果表明,SI-1565对MKN-45细胞GRASP65蛋白及m RNA有最佳敲除效果。从细胞增殖实验结果可以看出,相较于未转染(SI-NC)组,对照加抑制剂组(SI-NC+SP6)中细胞的增殖能力明显降低(P<0.01)。但敲低加抑制剂组(SI-1565+SP6)与敲低组(SI-1565)之间无显著差异(P>0.05)。FCM结果显示,当SP600125作用于各组后,对照加抑制剂组(SI-NC+SP6)凋亡能力明显比对照组(SI-NC)高(P<0.001)。而敲低加抑制剂组(SI-1565+SP6)与敲低组(SI-1565)差异无统计学意义(P>0.05)。SI-NC+SP6组与SI-NC组相比及SI-1565+SP6与SI-1565组相比,细胞均明显阻滞于G2时期。Transwell结果显示,SI-NC+SP6组细胞侵袭能力明显比SI-NC组弱(P<0.05),而SI-1565+SP6组与SI-1565组差异无统计学意义(P>0.05)。从蛋白印迹的实验结果可以得出,cyclin A、bcl-2的表达与各实验组中GRASP65的变化成正比。P21、cleaved caspase3的表达与GRASP65蛋白表达的改变相反。结论:GRASP65影响MKN-45细胞的增殖、凋亡、周期和侵袭,其作用通路可能是JNK信号通路。可能与JNK信号通路磷酸化状态的GRASP65变化有关,进而影响增殖、凋亡、周期等蛋白的表达,从而影响MKN-45的增殖与凋亡等。