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木材的实质是木质部,木质部的主要成分是纤维素。通过克隆与木材纤维素合成相关的酶的基因,分析研究其功能和相互作用方式,可为揭示木质部纤维素合成机理奠定基础,并探索一条利用基因工程来研究林木纤维素生物合成机理的途径;并且可以有针对性地对林木材质进行改良,定向培育,进而提高重要经济林木材和木材纤维的品质与产量。杨树是林木遗传育种和分子生物学研究的模式植物,大青杨又是优良的纸浆材树种,具有生长旺盛、容易繁殖等特点,是我国优良的经济林树种。本研究以大青杨为材料,克隆其纤维素合成酶基因,通过试验主要结果有:(1)以大青杨幼嫩叶片DNA为模板,克隆纤维素合成酶基因组片段,经序列分析表明该片段长1846bp,其中921bp为编码序列,中间间隔分布两个大小不同内含子,编码序列与毛果杨(Populus trichocarpa)纤维素合成酶基因(XM002305024.1)cDNA序列同源性达到98%,与欧洲颤杨的PtrCesA1基因和毛白杨PtoCesA1基因的cDNA序列同源性达到96%。(2)以大青杨次生木质部为材料,采用反转录PCR扩增方法,获得了PusC1(237bp)和PusC2(481bp)两个纤维素合成酶基因片段:两个基因片段与毛果杨纤维素合成酶基因(XM002305024.1)相似性分别为94%和95%;与欧洲颤杨PtrCesA1基因(AF072131.1)也分别有92%和93%的相似性。推测PusC1和PusC2基因片段编码的蛋白质也与毛果杨纤维素合成酶基因预测的编码蛋白相似性分别达到了94%和93%;与欧洲颤杨PtrCesA1基因预测的编码蛋白相似行分别为93%和92%。(3)优化得到大青杨PCR反应各因素的最佳体系:TaqDNA聚合酶2.0U,Mg2+1.5mm01·L-1,dNTP 0.15mmol·L-1,引物0.5μmol·L-1,DNA模板1μl。(4)对大青杨的叶片基因组DNA提取的方法和次生木质部总RNA的方法都进行了总结优化,可以获取较高质量的DNA和RNA,能满足分子生物学实验要求。