研究背景宫颈癌高居女性恶性肿瘤发病的第二位，高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染被认为是其发生与发展的必要前提。大量研究已经初步阐明了HPV致宫颈癌的机理：部分病毒基因片断整合到宿主DNA中，并且在感染的细胞中长期存在，病毒E6、E7基因过表达，最终导致细胞不可控制地无限增殖。在已经确认的15种高危HPV类型中最为常见的是：16、18、45和31型；同时，不同类型的HPV流行率存在一定的地域差异，因此，有必要采用有效的检测手段对不同地区好发的常见HPV的型别进行研究。近年来对宫颈癌预后因子的研究发现：在预测疾病转移和复发的作用上，除原发部位肿瘤的组织病理学参数之外，癌肿盆腔淋巴结转移的情况也具有重要的预测价值。目前的研究显示，盆腔淋巴结转移是宫颈癌患者术后生存率最有价值的预测因子。然而，临床上也发现部分临床分期尚可、淋巴结没有增大、组织学上也无转移的病例最终预后较差。这种现象提示可能有常规病理检查不能发现的微小转移病灶的存在。所以有必要寻找一种能更有好地判断癌肿盆腔淋巴结转移情况的方法，从而有助于提高对疾病术后复发、患者死亡等不良预后的预测效能。国外已有小样本研究发现组织学检查阴性的盆腔淋巴结中可检测到HPV-DNA的存在，因此对宫颈癌患者盆腔淋巴结HPV-DNA存在情况与癌肿淋巴结转移的关系值得深入研究。此外，在明确的疾病分期和预后因素的基础上，宫颈癌的治疗模式开始从单一的传统手术治疗模式向个体化治疗模式演变。长期以来，对宫颈癌的手术范围和术式存在诸多争议。临床分期为ⅠB期的宫颈癌患者的盆腔淋巴结转移率仅为15％，这就意味着超过80％的患者接受了对她本人来说没有益处的淋巴结清扫术，并承受了与之相关的手术风险，如增加手术时间、失血量以及淋巴囊肿的发生等。因此，明确宫颈癌患者淋巴结转移范围，有利于将那些淋巴结转移阴性的患者选择出来，使之只需接受次广泛全子宫切除术而免于不必要的淋巴结清扫。第一部分高危型HPV检出情况与宫颈癌临床病理特征的关系【目的】1．探讨广东地区宫颈癌患者原发部位癌肿组织中主要的高危型HPV检出型别2．分析其检出率与宫颈癌临床病理特征之间的关系；3．验证宫颈癌甲醛处理的石蜡包埋组织中HPV检测效果。【方法】研究对象为2005年11月-2006年12月在南方医科大学南方医院妇产科确诊并手术治疗的宫颈癌患者55例，FIGO分期为ⅠA～ⅡB期，均出生并长期生活于广东省。采用HPV通用引物GP5+／GP6+对手术切除标本中的HPV L1区基因序列进行聚合酶链反应(PCR)扩增，根据PCR产物序列分析对HPV分型，并分析高危型HPV检出率与宫颈癌患者临床病理特征之间的关系。此外，对其中25例患者的新鲜冻存标本和石蜡包埋组织标本进行了HPV检测对比。【结果】1．55例宫颈癌组织中HPV-DNA的检出率为80％，其中单纯HPV16型检出率最高。同时检出广东地区少见的HPV45型1例。2．临床分期Ⅱ期、病理分化程度较低以及组织病理学检查确认有淋巴结转移病例中HPV18型和HPV16、18混合型感染所占比例大于单纯HPV16型感染。3．25例分别留取了新鲜冰冻组织标本和石蜡包埋组织标本的宫颈癌患者，两种标本的HPV检出率没有显著性差异，HPV检出情况基本吻合。【结论】1．广东地区宫颈癌患者感染HPV以16型最为多见。2．单纯感染HPV18型和有多重感染与临床分期晚、细胞分化低及淋巴结转移有关，此类患者临床风险高于单纯HPV16型感染者。3．选择合适的PCR引物，能保证宫颈癌石蜡包埋组织标本中HPV-DNA检测效能。第二部分两种不同检测方法对宫颈癌石蜡包埋组织中HPV检出情况的比较【目的】评价两种不同的HPV检测方法在宫颈癌石蜡包埋肿瘤组织中HPV检出效果，以寻找检测HPV-DNA的较好方法。【方法】研究对象为2006年1月-2006年12月在南方医科大学南方医院妇产科确诊并手术治疗的宫颈癌病例36例，FIGO分期为ⅠA～ⅡB期。采用原位杂交和PCR直接测序两种方法对宫颈癌石蜡包埋肿瘤组织行HPV-DNA检测，比较二者检出率的差异。【结果】1．PCR法与原位杂交法对宫颈癌石蜡包埋肿瘤组织中HPV-DNA的检出率分别为77.8％和24.5％。2．原位杂交法检测HPV-DNA的阳性样本用PCR法检测同样全部呈阳性；PCR法检测为阴性结果的样本，采用原位杂交法也未发现有HPV-DNA的存在。3．PCR直接测序法发现原位杂交探针无法检出的HPV45型1例。【结论】PCR法对宫颈癌石蜡包埋组织HPV-DNA的检测效果优于原位杂交法。第三部分盆腔淋巴结HPV DNA检出率与宫颈癌临床转移的关系【目的】探讨宫颈癌患者盆腔淋巴结HPV-DNA检出与组织病理学确定的淋巴结转移之间的关系。【方法】研究对象为2006年1月-2006年12月在南方医科大学南方医院妇产科确诊并手术治疗的宫颈癌病例31例，FIGO分期为ⅠA～ⅡA期。采用HPV通用引物PCR直接测序的方法扩增宫颈癌患者原发部位肿瘤组织及盆腔淋巴结组织HPV-DNA L1区基因序列，分析淋巴结组织中HPV阳性率与临床病理特征之间的关系。【结果】1．31例宫颈癌患者盆腔淋巴结中HPV-DNA检出率为58.1％。2．组织病理学确认有盆腔淋巴结转移的13例宫颈癌患者中HPV-DNA检出率为84.6％；两例转移淋巴结未能检测到HPV-DNA的患者其原发部位肿瘤组织样本中HPV-DNA也均为阴性。3．组织病理学检查无淋巴结转移的18例宫颈癌患者盆腔淋巴结HPV-DNA检出率为27.8％，明显低于组织病理学确认有淋巴结转移患者的检出率。4．盆腔淋巴结组织病理学确认转移和HPV-DNA检出具有相似的高危因素。5．组织病理学检查和HPV-DNA检测均提示阳性淋巴结中闭孔、髂内、髂外这三组淋巴结占90％以上。【结论】1．盆腔淋巴结HPV-DNA检出阳性是一个有意义的淋巴结转移预测因子。2．闭孔、髂内、髂外三组淋巴结是最主要的前哨淋巴结。全文小结1．广东地区宫颈癌患者感染HPV以16型最为多见。2．单纯感染HPV18型和有多重感染的患者临床风险高于单纯HPV16型感染者。3．选择合适的PCR引物，能保证宫颈癌石蜡包埋组织标本中HPV-DNA检测效能。4．PCR法对宫颈癌石蜡包埋组织HPV-DNA的检测效果优于原位杂交法。5．盆腔淋巴结HPV-DNA检出阳性是一个有意义的淋巴结转移预测因子。6．闭孔、髂内、髂外三组淋巴结是最主要的前哨淋巴结。