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目的:通过由中医健脾解毒法则组方的肠胃清对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染致胃癌形成过程的干预,从核因子kB(Nuclear factor kappa B,NF-kB)信号通路角度探讨肠胃清防治胃癌发生的作用靶点,为肠胃清治疗Hp感染胃病提供实验依据。
方法:r285.5
1 体内实验:
1.1 快速尿素酶试验和组织切片改良的吉姆萨(Giemsa)染色鉴定小鼠胃粘膜Hp定植情况。
1.2 组织切片HE染色观察Hp感染小鼠胃粘膜病理改变。
1.3 末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测Hp感染小鼠胃上皮细胞的凋亡指数。
1.4 免疫组化法检测Hp感染小鼠胃粘膜NF-kB和其靶基因C-myc、CyclinD1、Bcl-xl的蛋白表达。
1.5 酶联免疫吸附剂法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定Hp感染小鼠血清NF-kB、核因子kB抑制性蛋白(Inhibitor kappa B,I-kB)浓度表达情况。
1.6 提取组织总RNA,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Reverse TranscriptionPolymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测Hp感染小鼠胃粘膜NF-kBmRNA、I-kBmRNA的表达。
1.7 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(Western blot)法检测Hp感染小鼠胃粘膜NF-kB蛋白水平表达。
2 体外实验:
2.1 用中药血清药理学方法提取肠胃清药物血清和空白血清。
2.2 实时定量PCR检测Hp感染人胃癌细胞NF-kBmRNA、I-kBmRNA的表达。
2.3 Western blot法测定Hp感染人胃癌细胞I-kB蛋白水平表达。
结论:
1.经口灌喂的Hp可长期定植C57BL/6小鼠胃粘膜。
2.Hp感染C57BL/6小鼠可诱发其胃癌的发生,胃癌的发生率为22.2％。
3.Hp感染诱发C57BL/6小鼠胃癌发生与NF-kB信号通路及相关增值凋亡基因C-myc、CyclinD1、Bcl-xl有关。
4.肠胃清可降低C57BL/6小鼠Hp的定植率。
5.肠胃清降低C57BL/6小鼠胃癌的发生率与调控NF-kB信号通路及相关增值凋亡基因C-myc、CyclinD1、Bcl-xl有关。