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人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus HCMV)感染在人群中普遍存在,世界多数国家育龄妇女HCMV IgG抗体阳性率在76%以上,活动感染达6.3%,母婴垂直传播率高达35%。国内一些学者报道我国婴儿先天性HCMV感染发病率占1.2-12%不等。据此推测我国每年由HCMV先天感染所致伤残儿约4万名。HCMV先天感染引起的疾病或畸形主要包括:黄疸性肝炎、胆道闭锁、先天性巨结肠、小头畸形,以及智力低下等神经系统畸形等。
至今为止,HCMV先天感染的致病机理尚不清楚。HCMV感染的不同临床表现和组织趋向性,可能与宿主的免疫状态有关,但病毒的自身结构,尤其是与病毒毒力、组织嗜性和与病毒逃避机体免疫的相关基因的差异,可能是决定HCMV先天感染病情轻重及引起何种器官受损的内在因素。
1996年Cha等研究发现,在Toledo等临床低传代分离株中存在一个新的DNA区域,这个区域至少包括UL133-UL151共19个开放阅读框架ORFs(open readingframe),而在实验室株AD169中却不存在这一区域。作者推测,实验室株在细胞培养反复传代过程中出现了UL/b’区遗传信息的丢失和重排,导致HCMV毒力和致病性的明显减弱。因此,UL/b’区基因可能在HCMV致病过程中发挥重要作用。目前,关于HCMV UL/b’区基因的结构特点和表达产物功能的研究成为国际HCMV致病机理研究领域最活跃的部分。
UL144基因是一个具有高度多态性的基因,编码一种I型跨膜糖蛋白,是一种疱疹病毒穿入介子(HveA或HveM)的类似分子,HveA是肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族成员之一。研究发现,UL144基因分型可能与HCMV先天感染致病性有关。在这一区域中另一个具有高度多态性的是UL146基因。UL146和UL147基因编码产物一种α趋化因子,通过损伤外周血白细胞,特别是中性粒细胞影响宿主的免疫应答。UL146基因呈现多个基因型,但在个体内基因的变化高度保守。
最新的研究结果表明UL141蛋白能够通过下调受累细胞上的NK细胞激活受体的配体CD155的表达,从而逃避NK细胞的杀伤作用。但目前尚无来自HCMV先天感染分离株的UL141基因序列分析的研究报道。
Cha等对UL141基因的转录子结构进行了推测。研究发现在UL138与UL139之间的非编码区存在两个TATA序列,UL141与UL142之间的非编码区及ul142ORF内分别存在两个POLY(A)信号,而跨越UL139、UL140及UL141三个ORF的约2.5kb片断中无转录信号。说明这三个基因可能共用其中的转录信号,转录和表达可能存在某种联系。这种转录方式是否真的存在,这是否预示着这三个基因功能之间存在某种联系。
在已经获得的人巨细胞病毒一些基因的mRNA结构中发现,人巨细胞病毒存在复杂的转录表达形式,并且基因mRNA结构的变化影响其功能的变化。UL57基因包含在3个不同转录子当中,这些转录子的5’末端分布在UL57基因起始密码上游800bp片段的不同位置,3’末端则跨越更大的范围,最大的一个转录子3’末端终止在UL51基因下游的PolyA信号处。UL57基因不同转录子受不同转录起始位点的调控。又如,UL4基因的mRNA5’端上游含有232个核苷酸的非编码序列,其中含有3个AUG起始信号,产生了一些小的阅读编码框。其中,第二个阅读编码框的编码产物能够抑制下游的UL4基因的表达。2000年,首次发现HCMV编码一个IL-10的类似物,根据mRNA结构分析发现,其基因起始位置与UL111A基因一致,而比UL111A基因提前终止。该基因包括3个外显子和2个内含子。可见,HCMV基因组的转录过程无论在转录子种类,mRNA拼接以及表达调控等各方面,都具有非常复杂的机制,与这些复杂机制对应的是复杂的mRNA结构。因此获得HCMV基因的转录子结构是揭示其致病机理的前提条件。
本研究分别在基因的DNA水平探讨UL141基因在临床低传代分离株中的多态性及其与HCMV先天感染不同致病性之间的关系,并且从转录水平研究UL141基因能够转录出哪些转录子,进而获得转录子的一级结构。为进一步探讨HCMVUL/b’区其它基因乃至整个基因组其他基因的转录子结构,本研究构建了HCMV全长cDNA文库,为进一步探讨预测基因的表达潜力,研究HCMV转录子结构和基因表达调控奠定基础。