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前言
盆腔器官脱垂(Pelvic organ prolapse,POP)是一种常见、多发的疾病,影响妇女的身心健康和生活质量。它表现为盆腔器官(子宫、阴道、膀胱、直肠)脱垂,包括大小便失禁、盐腔疼痛、性功能障碍等。年龄增加、产次、绝经、体重指数(Body Mass Index,BMI)是POP发生的危险因素,分娩损伤后盆底的重建,与前述的危险因素一起,导致盆底支持结构的逐渐衰弱。伴POP的妇女,盆腔支持结构(盆内筋膜和子宫骶骨韧带[Uterosacral ligaments,USLs])的生物化学分析表明,细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的新陈代谢,包括胶原含量和质量以及基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinases,MMPs)的表达都发生了改变。同源异型盒(Homeobox,HOX)基因是编码调节哺乳动物胚胎泌尿生殖道的生长和发育的转录因子,其中HOXA簇介导从中肾管到形态明显的雌性生殖器官的片段分化,HOXA11与子宫下段和宫颈的发育密切相关。成对的USLs由平滑肌和胶原构成,是骨盆支持系统的关键结构,其组织稳定的关键因素是胶原、纤维蛋白、弹力纤维以及参与降解其他细胞外基质的基质金属蛋白酶。USLs起自宫颈,经由宫颈后外侧与远端的骶骨相连,起到支持子宫和阴道上段的作用。本研究的目的在于研究POP妇女USLs中HOXA11和MMP-2的表达情况,期望为POP的预防、诊断和治疗提供一定依据。
材料与方法
一、材料
29例子宫脱垂患者的USLs组织及13例非脱垂患者的USLs组织来自2006年11月到2009年3月间中国医科大学附属盛京医院妇科手术切除的组织。所有组织均经福尔马林固定,常规石蜡包埋。
二、主要试剂
兔抗人HOXA11免疫组化多克隆抗体购于ABCAM公司(ab28699),鼠抗人基质金属蛋白酶-2免疫组化单克隆抗体(MAB-0244)、DouSPTM免疫组化双染试剂盒(KIT-9999)均购于福州迈新生物技术开发有限公司。
三、方法
免疫组织化学双重染色
按链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(S-P)法行免疫组织化学双重染色。切片常规脱蜡至水,抗原修复液进行抗原修复,一抗(HOXA11)4℃孵育过夜,BCIP/NBT显色液显色,双染增强液37℃孵育,一抗(MMP-2)37℃孵育,AEC显色,苏木素复染。用PBS代替一抗作为阴性对照。结果判定:细胞核中见蓝黑色颗粒和(或)细胞质中见鲜红色颗粒为HOXA11和(或)MMP-2阳性表达。计数在每个视野中每100个细胞中阳性的细胞数,阳性区域面积>5%为HOXA11或MMP-2阳性表达。
四、统计学分析
应用SPSS13.0统计分析软件,HOXA11与MMP-2表达和POP临床病理特征的关系用卡方检验,计算Pearson列联系数分析HOXA11与MMP-2表达关系;P<0.05为有统计学意义。
结果
1、HOXA11蛋白主要表达于细胞核。
在脱垂组患者USLs组织HOXA11阳性表达率为37.93%,而在非脱垂组阳性表达率为84.62%,二者比较差异具有显著性(P=0.005)。HOXA11在脱垂组(Ⅱ度)USLs阳性表达率为35.00%,脱垂组(Ⅲ+Ⅳ)USLs阳性表达率为44.44%,二者比较差异无显著性(P=0.694)。
2.MMP-2主要表达于细胞质。
在脱垂组USLs阳性表达率为65.52%,在非脱垂组阳性表达率为30.77%,二者比较差异具有显著性(P=0.036)。MMP-2在脱垂组(Ⅱ度)USLs阳性表达率为50.00%,在脱垂组(Ⅲ+Ⅳ)USLs阳性表达率为100.00%,二者比较差异具有显著性(P=0.011)。
脱垂组患者USLs组织HOXA11与MMP-2共表达阳性为11例,HOXA11与MMP-2均阴性为10例,经卡方检验,HOXA11与MMP-2表达有相关性,关联程度为0.567(列联系数C=0.567,P=0.003)。
结论
1、HOXA11在脱垂组患者子宫USLs中表达低于非脱垂组。
2、MMP-2在脱垂组患者子宫USLs中表达高于于非脱垂组,且随着脱垂程度增强表达水平增加。
3、POP患者USLs中HOXA11和MMP-2表达有相关性。