论文部分内容阅读
simian virus40(SV40)是属于多瘤病毒属的双链DNA病毒,其早期基因编码产物大T抗原(SV40Tag)具有致癌性。流行病学发现在人的多种肿瘤组织中检测到SV40病毒基因组序列。成神经管细胞瘤是一种小脑神经外胚层肿瘤,是最常见的儿童中枢神经系统肿瘤,发病率约占儿童脑肿瘤的25%,死亡率排在儿童肿瘤疾病之首。目前已有报道,包括shh,Wnt,erbB-2和Igf在内的多种信号通路的畸变与成神经管细胞瘤的形成密切相关。 本论文第一章通过显微注射技术构建了四环素诱导调控SV40Tag的转基因小鼠模型。通过诱导实验证明在得到的首建转基因小鼠中,line 123的后代经BOX诱导后在脑组织中检测到了SV40Tag的表达。 论文第二章对DOX诱导后line 123小鼠脑部所生肿瘤进行了组织病理学、分子标记和免疫组织化学分析,结果证明该肿瘤为源自小脑的成神经管细胞瘤。这一结果表明我们得到了成神经管细胞瘤的转基因小鼠模型。 论文的第三章通过表达谱基因芯片对模型转基因小鼠所发肿瘤进行了分析。结果显示,Wnt和shh信号通路在该模型小鼠中变化不明显,而Igf通路和erbB-2变化明显,并以Real time PCR和Western blotting对芯片结果做了进一步验证,所得结果基本与基因芯片结果一致。通过免疫组织化学及共沉淀实验,我们还发现SV40Tag可以和Igf通路中的IRs-1结合,从而使后者进入细胞核。这提示我们,SV40Tag可能通过这种结合作用影响Igf通路的变化,促进肿瘤发生。 为了更为有效地利用该模型小鼠,我们通过原代培养建立了该模型的肿瘤细胞系。同时还利用几种抗肿瘤药物对细胞进行了药物敏感性实验。结果表明细胞对受体酪氨酸激酶通路的抑制剂具有一定的敏感性。 综上,本研究建立了四环素调控SV40Tag表达的转基因小鼠成神经管细胞瘤模型,并对模型小鼠肿瘤细胞基因表达情况进行分析和筛查,结果表明SV40Tag的表达可通过某种方式激活Igf以及erbB-2通路,进而促进肿瘤的形成。同时还建立了原代培养的肿瘤细胞,提升了模型的利用效率。这一工作为研究SV40Tag的致瘤机理以及成神经管细胞瘤的预防、临床诊断以及治疗提供了一个很好的在体模型工具。