论文对本实验室鉴定的鸭瘟病毒UL31基因(GenBank登录号EF643559)进行了克隆、生物信息学分析、原核表达及抗体制备,并利用制备的的多克隆抗体对其部分生物学特性及在感染宿主细胞内的定位分布进行了研究,主要内容可归纳如下:1.鸭瘟病毒UL31基因的克隆及分子特性分析DPV UL31基因大小为933bp,编码310aa,等电点为7.56;UL31蛋白没有信号肽和跨膜区,主要定位于细胞核中,共有28个潜在的磷酸化位点,主要集中于N末端,包含22个丝氨酸磷酸化位点,2个苏氨酸磷酸化位点、4个酪氨酸磷酸化位点。序列对比分析表明DPV CHv UL31与禽疱疹病毒首先类聚,并与α疱疹病毒的氨基酸同源性较之与β、γ疱疹病毒要高。其中DPV UL31氨基酸序列与MDV-1、MeHV-1、BoHV-1的同源性高达58.781%,59.140%和55.063%,表明它们具有相似功能。2.DPV UL31基因的原核表达及多克隆抗体的制备通过构建pET-32-UL31重组原核表达载体,利用IPTG进行诱导表达,得到大小为55kD的重组融合蛋白,与预期表达的蛋白大小相一致。薄层扫描分析表明重组蛋白占菌体总蛋白的21.5%,主要以包涵体的形式存在。最佳表达优化条件为0.8 mmol/L的IPTG,37℃下诱导3h。重组蛋白纯化后制备兔抗UL31血清的琼脂糖扩散试验效价为1:32,Western blot结果显示能特异性识别UL31基因产物,表明该多克隆抗体可应用于对UL31基因进行功能研究。3.DPV体外感染宿主细胞UL31基因转录分析本研究应用荧光定量PCR方法对DPV感染宿主细胞后病毒UL31基因mRNA表达水平的变化进行了动态分析。结果表明,最早可在DPV感染宿主细胞后1h检测到该基因转录产物,随后转录产物量迅速放大,36h达高峰,随后逐渐减少。结果表明DPV UL31基因可能属于晚期基因。4.DPV UL31基因产物在感染宿主细胞中的细胞定位通过细胞免疫荧光进行DPV UL31在感染宿主DEF中的细胞定位检测,结果表明,UL31基因产物定位在感染宿主细胞的细胞核中并呈动态变化过程:特异性荧光可最早在感染后4h检测到,其呈弥散状分布于细胞核中;随后荧光强度随感染时间的增加而增强,到36h时,荧光呈细小的颗粒状分布于细胞核中;随后荧光强度减弱,到60h时,大部分荧光转移到细胞核边缘。DPV UL31基因产物的这种定位变化可能与其介导病毒出芽的功能相关。5.DPV UL31抗原在人工感染鸭组织的定位分布用DPV CHv强毒株感染成年鸭复制鸭瘟急性病例,分别于接种后不同时间,取心、肝、肾、脾、胸腺、十二指肠、法氏囊、脑和胰等组织制作石蜡切片,进行间接免疫荧光检测DPV UL31在人工感染鸭组织的定位分布。结果表明:心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、脑、胸腺、十二指肠、空肠、回肠、直肠等免疫荧光呈阳性或强阳性,胰腺、肌肉、皮肤呈阴性。最早可在感染后2h检测到DPV UL31抗原位于胸腺、脾脏、法氏囊:感染4d后可在大部分组织器官中检测到DPV UL31。该结果有利于对鸭瘟病毒的诊断及致病机理的研究。