论文部分内容阅读
肝脏恶性肿瘤又称为肝癌，肝癌分为原发性和继发性两大类。作为世界癌症死亡率排行第二位的癌症，肝癌的主要诱发原因在于感染乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒。S100A2、S100B是S100家族中重要的成员，S100家族是一组大小为10~13kD的钙结合蛋白。报道显示S100A2在不同的癌症中的表达存在差异，在一些癌症中表达上调，而在另外一些癌症中则表现为下调。S100B常常被认为是一种神经标志物，但有报道发现在一些肿瘤也存在表达差异。
与正常肝细胞相比，在我们所检测的5种肝癌细胞系中，S100A2在部分肝癌细胞系中有明显上调，而在另一部分细胞系中有明显下调。而S100B在5种肝癌细胞系中全部有明显上调。我们猜测S100A2、S100B两种蛋白对肝癌细胞的生物活性均有有影响，因此通过以下实验进行验证。
首先在体外合成过表达质粒，转染正常的肝细胞HL-7702，筛选获得过表达S100A2或S100B的稳定转染细胞系，进行生物学功能验证。结果发现，过表达S100A2或S100B的肝细胞系增强了细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆形成能力，处于细胞周期S期的细胞增多，并且在一定程度上影响了细胞的凋亡。
然后，我们选取S100A2、S100B两种蛋白都高表达的HepG2，转染S100A2或S100B的sh-RNA，沉默其表达。结果发现抑制S100A2或S100B表达后，HepG2细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆形成能力均减弱，处于细胞周期S期的细胞减少，说明抑制S100A2或S100B后HepG2的癌细胞特性有明显的减弱。
最后，我们合成p53的si-RNA，将S100A2或S100B的sh-RNA与p53的si-RNA共转染到HepG2中。结果发现：与单独抑制S100A2或S100B的HepG2相比，共转染后S100A2、S100B基因和蛋白的表达有所恢复，共转染的HepG2的增殖、迁移、侵袭、克隆形成能力及细胞中S期的比率也有所恢复。结果说明p53参与S100A2、S100B影响HepG2细胞生物活性的作用。
与正常肝细胞相比，在我们所检测的5种肝癌细胞系中，S100A2在部分肝癌细胞系中有明显上调，而在另一部分细胞系中有明显下调。而S100B在5种肝癌细胞系中全部有明显上调。我们猜测S100A2、S100B两种蛋白对肝癌细胞的生物活性均有有影响，因此通过以下实验进行验证。
首先在体外合成过表达质粒，转染正常的肝细胞HL-7702，筛选获得过表达S100A2或S100B的稳定转染细胞系，进行生物学功能验证。结果发现，过表达S100A2或S100B的肝细胞系增强了细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆形成能力，处于细胞周期S期的细胞增多，并且在一定程度上影响了细胞的凋亡。
然后，我们选取S100A2、S100B两种蛋白都高表达的HepG2，转染S100A2或S100B的sh-RNA，沉默其表达。结果发现抑制S100A2或S100B表达后，HepG2细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆形成能力均减弱，处于细胞周期S期的细胞减少，说明抑制S100A2或S100B后HepG2的癌细胞特性有明显的减弱。
最后，我们合成p53的si-RNA，将S100A2或S100B的sh-RNA与p53的si-RNA共转染到HepG2中。结果发现：与单独抑制S100A2或S100B的HepG2相比，共转染后S100A2、S100B基因和蛋白的表达有所恢复，共转染的HepG2的增殖、迁移、侵袭、克隆形成能力及细胞中S期的比率也有所恢复。结果说明p53参与S100A2、S100B影响HepG2细胞生物活性的作用。