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前期临床研究表明,开心解郁方能有效改善血管性抑郁症患者情绪低落、兴趣减退的症状,对胸闷、善太息、乏力、失眠、不思饮食等躯体症状的疗效优于氢溴酸西酞普兰、盐酸氟西汀,体现了开心解郁方治疗血管性抑郁症的优势。在应用中发现,开心解郁方不只对老年血管性抑郁患者有效,对青中年的抑郁状态、抑郁症、焦虑症、慢性疲劳综合征等均有良好的作用,这些心身疾病的主诉症状往往恰是开心解郁方在血管性抑郁症中的优势治疗作用。为了充分发挥中医药改善抑郁症状副作用小、易于患者接受的优势,发挥有效方剂的应用价值,多方面满足抑郁症患者的临床需求,基于前期血管性抑郁症的动物模型实验基础,进一步研究开心解郁方对抑郁症模型动物的抗抑郁效应与抗抑郁作用机理。研究目的通过对抑郁症模型大鼠给药后的行为学评价,评估开心解郁方抗抑郁的直接疗效;通过观察脑组织超微结构、病理形态和检测神经再生标志蛋白,探讨开心解郁方对抑郁症关键脑区海马的神经元保护作用和对成年神经再生的作用,初步探讨其对大脑结构和功能可塑性的影响。为扩大开心解郁方的适应症,促进该方的二次开发,更高效应用以满足抑郁症患者的用药需求,进一步提供基础实验支持。研究方法1采用清洁级、SD、雄性大鼠,根据基础糖水偏好水平将大鼠分为正常组、模型组,模型组通过慢性不可预知性温和应激方式造模4周,以模拟抑郁症患者的快感缺失状态,根据糖水偏好水平,将模型组进一步分层随机分为模型组、氟西汀组、开心解郁方组,各给药组连续给药4周,正常组、模型组给与等体积的纯净水。每周进行糖水偏好实验,记录体重变化,给药2周与4周后分别测试强迫游泳不动时间。2给药4周后,各组取海马齿状回(dentategyrus,DG)区域放入戊二醛固定,应用透射电子显微镜,观察DG区神经元超微结构改变;各组取整个脑组织,进行固定、包埋,切取脑片进行苏木精-伊红染色,显微镜下观察海马安蒙角(Cornu ammonis,CA)1、CA2、CA3、CA4、DG 区细胞层次、细胞数目、细胞排列分布、细胞形态,分别拍照做描述分析。3给药4周后,大鼠心脏灌流取脑,取包含海马组织的冠状位冰冻切片,进行海马齿状回未成熟神经元标志物微管相关蛋白Doublecortin(microtubule-associated protein Doublecortin,DCX)的免疫荧光染色,荧光显微镜拍照,计数海马齿状回颗粒下区(subgranularzone,SGZ)DCX+细胞数目。研究结果1糖水偏好实验结果:造模过程中,模型组较正常组比较,糖水偏好水平下降明显,模型组糖水偏好在造模5周达到最低水平。与模型组相比,开心解郁方组给药一周后糖水偏好水平回升,至给药3周持续升高。与模型组比,氟西汀组给药两周后糖水偏好水平开始升高,至给药4周持续升高。给药四周后,各组糖水偏好水平无差异(P>0.05)。强迫游泳不动时间结果:给药2周、4周后,与正常组比较,模型组强迫游泳不动时间增加;与模型组比较,开心解郁方组、氟西汀组不动时间均降低,开心解郁方组给药2周、4周不动时间与模型组有显著差异(P<0.01),氟西汀组给药4周与模型组有显著差异(P<0.01)。2光镜下分析海马各区神经元形态变化:CA2、CA3、DG区细胞存在较明显异常,CA1和CA4区未见明显异常。正常组CA2、CA3区细胞层次清晰,排列较为紧密整齐,细胞结构清晰。在CA2区,模型组细胞层次变少,细胞数目明显减少,细胞间隙变大,排列混乱、疏松,细胞结构模糊,氟西汀组、开心解郁方组与正常组接近。在CA3区,与正常组比较,模型组细胞数目减少,细胞间隙变大,排列较疏松,氟西汀组、开心解郁方组与正常组接近,开心解郁方组细胞有所缺失。在DG区,从细胞层次、数目上看,正常组DG区细胞层厚,排列紧密整齐,模型组细胞层变薄,细胞数目明显减少,细胞间隙变大,氟西汀组与正常组接近,开心解郁方组较正常组细胞排列稍有疏松;从细胞形态上看,各组细胞结构清晰,但各给药组与正常组比较均存在不同程度的神经元细胞水肿,氟西汀组水肿细胞最多。电子显微镜下,给药4周后,正常组,细胞轮廓清晰,细胞结构无异常,线粒体未见变化,核膜光滑,染色质均匀分布。模型组,无细胞轮廓,细胞结构松散,大部分线粒体肿大、崤减少甚至消失呈空泡变,细胞核碎裂。氟西汀组,细胞轮廓尚在,细胞结构致密,细胞膜溶解,细胞质凝结,大部分线粒体肿大、嵴减少,核膜成波浪形,核皱缩、失去原本形态。开心解郁方组,细胞轮廓清晰,细胞结构无异常,较多的线粒体肿大、嵴变减少甚至消失呈空泡变,核膜光滑,染色质分布较均匀。3从DCX的免疫荧光染色结果分析,各组DCX+数目无统计学差异(P>0.05)。从标准差可看出,各组SGZDCX+数目组内差异较大,氟西汀组、开心解郁方组DCX+细胞数目差异过大。各组虽无统计学意义,但模型组DCX+细胞有减少,氟西汀组、开心解郁方组DCX+细胞数目有增加的趋势。研究结论开心解郁方在抑郁症模型大鼠上显示出了良好的抗抑郁效果,且起效时间可能早于氟西汀。开心解郁方的抗抑郁作用可能与其保护海马神经元,促进神经再生,重塑海马结构和功能有关。抑郁模型大鼠海马SGZ神经再生作用可能受实验动物的个体差异影响较大。