甜叶甙R1(Suavissimoside R1，S．R1)是我室从茅莓提取物中纯化出的一种三萜类化合物，我室前期研究显示，甜叶甙R1对MPTP诱导的PD小鼠模型以及MPP+诱导的大鼠中脑腹侧多巴胺能神经元凋亡模型除了可保护神经元外，还可增加PD模型小鼠纹状体DA含量，但是这些效应的机制尚未清楚。 本课题采用正常C57小鼠及PC12细胞作为实验对象，研究甜叶甙R1增加DA含量的可能机制。由于TH是DA合成的限速酶，我们主要研究甜叶甙R1对TH表达量的影响，并初步探讨甜叶甙R1提高TH表达量的细胞作用机制。 (一)甜叶甙R1对正常小鼠腹侧中脑TH、p—PKC、PKC、p=PKA、PKA、p—ERK和ERK蛋白含量的作用 实验方法：甜叶甙R1以0.5mg/kg剂量分别给予正常小鼠口服灌胃1，3，5，10天，并设立相同天数的溶剂对照组。取小鼠腹侧中脑组织，用Western blots的方法检测TH、p—PKC、PKC、p—PKA、PKA、p—ERK和ERK蛋白表达量变化。 实验结果：甜叶甙R1处理1，3，5和10天后，分别对TH蛋白与内参蛋白甘油醛—3-磷酸脱氢酶(GAPDH)，p—PKC与PKC、PKC与GAPDH、p—PKA与PKA、PKA与GAPDH、p—ERK和ERK、ERK和GAPDH进行光密度值分析，将得到的比值与相应天数溶剂对照组的比值做统计学分析，发现小鼠的腹侧中脑TH蛋白、p—PKC、PKC、p—PKA、PKA和ERK蛋白均有所增加：TH蛋白分别增加了9％，46％(P<0.05，与正常对照组比较)，100％(P<0.01，与正常对照组比较)和54％；p—PKC分别增加了6％，63％，85％(p<0.05)和10％；PKC分别增加了72％，27％，146％(p<0.05)和28％，p—PKA分别增加了10％，7％，45％(p<0.05)和18％；PKA分别增加了24％，22％，45％(p<0.05)和31％；ERK分别增加了61％，36％，51％(p<0.05)，和29％。其中处理5天的小鼠腹侧中脑TH、p—PKC、PKC、p—PKA、PKA和ERK增加最明显，且均具有统计学意义(p<0.05)。这些结果提示甜叶甙R1可以增加小鼠腹侧中脑TH、p—PKC、PKC、p—PKA和PKA蛋白量。 (二)细胞学实验 1.甜叶甙R1对NGF(50ng/mL)诱导分化的PC12细胞TH蛋白表达量的作用 1.1甜叶甙R1对分化的PC12细胞TH蛋白表达的时效关系 实验方法：以120μM的甜时甙R1分别作用分化的PC12细胞1d，2d，3d，4d，5d，6d，并设立相应天数等体积的DMSO溶剂对照组，用Western blots的方法检测TH蛋白表达量变化。 实验结果：与相应天数溶剂对照组相比，120μM甜叶甙R1作用6d时可以上调MGF诱导分化的PC12细胞TH蛋白表达量，与对照组相比增加了20％(p<0.05)。 1.2甜时甙 R1对分纯的PC12细胞硼蛋白表达的量效关系 实验方法：分别以20μM，60μM，120μM，240μM的甜叶甙R1作用分化的PC12细胞6d，用Western blotS的方法检测TH蛋白表达量变化。 实验结果：与溶剂对照组相比，60μM，120μM，240μM的甜叶甙R1处理6d，分别使PC12细胞的TH蛋白增加0.4％、19.9％(p<0.05)和11％。 2.甜叶甙R1对NGF(50ng/mL)诱导分化的PC12细胞TH、p—PKC(β11)/PKC的作用 实验方法：120μM甜叶甙R1作用分化的PC12细胞6d，用Western blots的方法检测TH、p—PKC(β11)/PKC表达量变化。 实验结果：与溶剂对照组相比，120μM甜叶甙R1处理6d，可使TH蛋白上调23.8％(p<0.05)，p—PKC(β11/PKC增加了9.9％(p>0.05)。 3.GF109203X拮抗甜叶甙R1增加分化的PC12细胞TH表达量的作用 实验方法：120μM甜叶甙R1与分化的PC12细胞孵化3天后再加入特异的PKC抑制剂2μM GF109203X培养3天，用Western blots的方法检测TH蛋白表达量变化。 实验结果：与对照组相比，甜叶甙R1组TH上调23.5％(p<0.05)，GF109203X+R1组TH增加2.6％(p>0.05 vs control；p<0.05 vs S．R1)。 结论： 综合以上结果得出：(1)甜叶甙R1可以增加正常小鼠腹侧中脑TH、p—PKC、PKC、p—PKA和PKA蛋白表达量。(2)120μM的甜叶甙R1作用6d可以上调NGF诱导分化的PC12细胞中的TH蛋白，2μM特异性PKC抑制剂GF109203X会阻断S．R1上调作用；以上结果提示甜叶甙R1增高TH含量的作用可能与激活PKC通路有关。