荧光假单胞菌M181产PCA的发酵工艺优化及rpoS基因克隆、测序及其功能研究

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本文根据荧光假单胞菌M18诱变株摇瓶发酵产吩嗪-1-羧酸初试结果,进行了14L发酵罐中发酵条件优化的研究。研究结果表明,采用一级种子培养,接种量为5%左右,在发酵后48h添加终浓度为20%发酵培养基,抑制剂在60h添加终浓度为12g/L。发酵过程中在线控制通气量0.4-1.1vvm,搅拌速度220-250r/min等条件下,最有利于菌体持续稳定生长,当发酵至72h时PCA产量达到最高,在1100μl/Ml以上。 从荧光假单胞菌M18基因组中克隆了RNA聚合酶的稳定期ss因子编码基因rpoS,推测其氨基酸序列与铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌的同源性分别为99.1%、87.35% 和87.8%。 对突变株M18R- 合成抗生素吩嗪-1-羧酸(PCA)和藤黄绿菌素(Plt)的动力学分析结果表明,在KB或PPM培养基中,突变株合成PCA的能力比野生型分别提高了25或5.78倍,但是,Plt的积累量不受影响。与野生型相比,突变株对碳源饥饿的耐性下降。同时,在碳源饥饿条件下对过氧化氢、乙醇和和氯化钠等环境胁迫的交叉保护性减小,存活率显著降低。
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