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第一部分肥胖及2型糖尿病患者脂肪组织视黄醇结合蛋白4 mRNA的表达及调控目的:通过测定肥胖及2型糖尿病患者皮下和腹内脂肪组织RBP4 mRNA的表达,研究不同糖脂代谢人群皮下和腹内脂肪组织RBP4 mRNA表达的差异,探讨影响RBP4表达调控的因素。对象与方法:筛选因非代谢性疾病而接受腹部择期手术的正常体重正常糖调节(NW-NGT)、单纯肥胖(OB)、T2DM患者(T2DM)各9例,取皮下和腹内脂肪组织,检测RBP4 mRNA的表达;对NW-NGT者腹内脂肪组织进行体外培养,观察胰岛素(INS)、糖皮质激素(DEX)、棕榈酸(PA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和噻唑烷二酮(TZD)对腹内脂肪组织RBP4 mRNA表达调控的影响。结果:1.RBP4 mRNA在腹内、皮下脂肪组织的表达差异:在NW-NGT者,二者差异无统计学意义(0.75±0.27比1.05±0.15,P>0.05);在OB或T2DM者,腹内脂肪的表达量显著高于皮下脂肪(分别为2.10±1.84比0.99±0.14,1.54±0.46比1.13±0.07,P<0.01或P<0.05)。2.RBP4 mRNA在正常、肥胖、T2DM者之间的表达差异:OB和T2DM者腹内脂肪RBP4 mRNA的表达量显著高于NW-NGT者(分别为2.10±1.84比0.75±0.28,P<0.01和1.54±0.46比0.75±0.28,P<0.05),而OB和T2DM者之间则无明显差异(2.10±1.84比1.54±0.46,P>0.05);三组人群皮下脂肪RBP4 mRNA的表达无统计学意义(1.05±0.15比0.99±0.14比1.13±0.07,P>0.05)。3.胰岛素、地塞米松、吡咯列酮、棕榈酸能显著上调RBP4 mRNA表达,与空白对照组相比,分别上升了2.13倍、0.84倍、2.04倍、4.88倍,差异有统计学意义;TNF-α能显著下调RBP4 mRNA表达,较空白对照组下降了38%,差异有统计学意义。小结:1. RBP4在腹内脂肪和皮下脂肪组织均有表达,二者在正常人群中无明显差异。2.肥胖和2型糖尿病患者腹内脂肪组织RBP4 mRNA的表达量显著高于皮下脂肪组织。3.脂肪组织RBP4 mRNA的表达受胰岛素、地塞米松等多种参与糖脂代谢及胰岛素抵抗因素的调控。4.肥胖患者腹内脂肪组织RBP4的高表达可能是血清RBP4升高的主要来源。第二部分PPAR-γ激动剂对高脂喂养SD大鼠RBP4表达的影响及机制目的:通过观察PPAR-γ激动剂吡咯列酮对高脂喂养SD大鼠RBP4水平的影响,探讨PPAR-γ激动剂对RBP4基因表达的调控机制。方法:24只雄性SD大鼠随机分为2组,普通饲料喂养组(NC组,n=8)和高脂饲料喂养(F组,n=16),8周后,将高脂组随机分为2组:高脂对照组(FC组,n=8)、高脂吡咯列酮干预组(F+Pio组,n=8),并分别予以生理盐水、吡咯列酮灌胃,共4周。干预前后均进行OGTT及ITT实验,取血测血糖、血脂各项指标及血清RBP4水平,并评价胰岛功能。实验结束后,取附睾脂肪、肝脏,称重,计算肝体比、脂体比。RT-PCR及Western-blot法检测附睾脂肪、肝脏组织RBP4 mRNA和蛋白表达水平。结果:喂养8周后,F组大鼠空腹血糖和胰岛素升高,血脂紊乱,糖耐量和胰岛素耐量减低,脂体比增加,血清RBP4水平显著升高(58.3±12.7 vs 26.8±7.3,p<0.01);吡咯列酮干预4周后,脂体比、肝体比均明显降低(P<0.01),血糖、血脂、肝功能显著改善(P<0.05或P<0.01),空腹胰岛素水平降低、胰岛素耐量明显好转(均P<0.01)。血清RBP4水平较FC组明显降低(30.3±13.9 vs 78.3±14.6, p<0.01)。此外,高脂喂养后,附睾脂肪组织RBP4 mRNA及蛋白和PPAR-γmRNA的表达量显著升高(均P<0.01),吡咯列酮组干预后附睾脂肪组织RBP4 mRNA及蛋白水平明显下降(P<0.01),PPAR-γmRNA的表达量继续上升,并明显高于FC组(P<0.01)。三处理组间肝脏组织RBP4及PPAR-γ的表达量无明显差异。相关性分析发现,血清RBP4与附睾脂肪RBP4 mRNA及蛋白的表达量正相关,相关系数分别为0.594和0.648(均p<0.01),并与血糖(AUCBG)、血脂各参数(TG、TC、LDL-C)、胰岛功能各项指标(FINS、AUCITT)、腹内脂肪的重量(肾周脂肪、附睾脂肪)及脂体比正相关。血清RBP4与肝脏组织RBP4无明显相关性。试验中亦未发现RBP4与PPAR-γ相关。小结:5.制作了高脂喂养诱导的胰岛素抵抗大鼠模型。6.高脂饮食可以诱发胰岛素抵抗,并导致血清及脂肪组织RBP4水平升高,二者呈显著正相关。7.吡咯列酮选择性激活脂肪组织PPAR-γ基因表达,发挥降低血糖、改善胰岛素抵抗作用,同时显著降低RBP4水平。结论1. RBP4在腹内脂肪和皮下脂肪组织均有表达,二者在正常人群中无明显差异。2.肥胖和2型糖尿病患者腹内脂肪组织RBP4 mRNA的表达量显著高于皮下脂肪组织。3.脂肪组织RBP4 mRNA的表达受胰岛素、地塞米松等多种参与糖脂代谢及胰岛素抵抗因素的调控。4.肥胖患者腹内脂肪组织RBP4的高表达可能是血清RBP4升高的主要来源。5.高脂饮食可以诱发胰岛素抵抗,并导致血清及脂肪组织RBP4水平升高,二者呈显著正相关。6.吡咯列酮选择性激活脂肪组织PPAR-γ基因表达,发挥降低血糖、改善胰岛素抵抗作用,同时显著降低RBP4水平。7.综合一、二部分,PPAR-γ激动剂吡咯列酮通过减轻糖脂毒性、改善胰岛素抵抗而间接降低体内RBP4水平。