新疆野生扁桃花粉PetSSK1基因的克隆与表达及功能初步分析

来源 :新疆农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:placaptain
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
新疆野扁桃(Amygdalus Ledebouriana Schlech)又称野巴旦杏,是蔷薇科李亚科桃属扁桃亚属的落叶灌木,是第三纪中新世的孑遗落叶树种,有植物界“活化石”之称。由于野扁桃林遭受病虫害,以及人为的破坏,所以加强其研究和科学保护显得十分重要。本研究分别采集新疆境内裕民,塔城,托里,布尔津,哈巴河共5个居群的单株,总计150份材料,利用同源克隆技术,从中选择一个基因型的野扁桃自交不亲和相关基因SSK1进行克隆,并通过生物信息学软件对克隆得到的基因进行分析,然后通过构建矮牵牛遗传转化体系,对野扁桃自交不亲和基因SSK1进行功能验证;以期本研究能为野扁桃的保护,以及为今后研究其自交不亲和机理提供一个参考。主要研究结果如下:1.本试验以新疆野扁桃植物叶片及花粉为试验材料采用Rt-PCR以及生物测序等技术,克隆得到了一个新的SSK1基因全长cDNA,将之命名为PetSSK1(NCBI收录号为:KT984123)。PetSSK1全长为602 bp,开放阅读框为534 bp,共编码了177个氨基酸,经生物信息学分析,PetSSK1蛋白的分子式为C910H1421N233O295S6,相对分子质量为20 538.0,理论推导半衰期为30 h,等电点为4.52,不稳定指数为41.48,平均疏水指数为-0.567,PetSSK1蛋白属于水溶性不稳定蛋白。首次从新疆野扁桃植株中克隆得到了SSK1基因全长。2.通过对矮牵牛再生体系的建立以及优化,得到矮牵牛最适宜的种子灭菌方法是:75%酒精处理30s,0.1%升汞处理6min,矮牵牛最适宜的诱导不定芽生长的培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA,最适宜的生根培养基为?MS+0.4 mg/L IBA,最终通过炼苗,定植得到生长良好的矮牵牛幼苗。3.构建野扁桃自交不亲和性相关基因PetSSK1的植物表达载体pCAMBIA1303-PetSSK1,采用根癌农杆菌介导法,将该基因导入矮牵牛,并研究了不同种类及浓度抗生素对矮牵牛再生的影响。结果表明:成功获得转化新疆野扁桃自交不亲和相关基因PetSSK1的矮牵牛植株,并筛选出矮牵牛的卡那霉素(Kan)和头孢霉素(Cef)的敏感浓度分别为25 mg/L、300 mg/L,并进一步通过PCR分子检测确认其为转基因阳性植株。
其他文献
鸡西矿业集团公司张辰煤矿西三采区3
期刊
本试验以枳壳、红橘和香橙为砧木,黄果柑实生树为对照,采用LI-6400便携式光合测定系统,在果实成熟期对其净光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)、胞间C02浓度(Ci)、气孔导度(Gs)等日
通过对不同基因型苦瓜品种种子发育过程中果实、种子的外部形态及生理指标的变化和降糖多肽-K提取、纯化条件的研究,从而确定种子的最佳采收时间。研究结果如下:1、对33个苦
本研究从优化苦瓜皂甙含量测定方法入手,确定超声波法对苦瓜皂甙的最佳提取工艺条件,然后研究苦瓜不同生长期和植株不同营养器官总皂甙含量的变化,同时对苦瓜品种间总皂甙含
幂的运算是整式乘除法的基础,学好幂的运算,是学习整式运算的关键之一,也是初中数学内容中的一项重要基本运算,下面就如何学好幂的运算,与同学们进行交流。一、掌握运算法测1