目的：20世纪70年代以来多种器官保存方法的研究从基础理论、动物实验到临床应用都取得了重大的进展，对于器官保存中细胞和组织损伤的基本机制有了更为深入地了解，使得器官的有效保存时间明显延长，诸如UW保存液、HTK液、Celsior液等保存液的开发与应用，极大地促进了临床移植工作的开展。我国最近10年来器官移植工作得到了飞速发展，在器官保存过程中的损伤机制以及器官保存液方面的研究也有一定的突破。但是，由于依赖进口保存液、成本高昂、不易获得，在一定程度上制约了我国器官移植的发展，本实验研究的目的就在于针对现有保存液的缺陷，研制具有自主知识产权的低成本的新型肝脏保存液(SWH液)，并通过与UW液的比较，初步探讨其对于大鼠肝脏的保存效果，以及探索肝脏保存的原理，延长肝脏保存的时限，为下一步过渡到临床应用提供一定的理论和实验依据。 材料和方法：1．采用规范的制剂标准，按照配方配制肝脏保存液，pH值调定为7.9±0.1，渗透浓度340mmol／L。 2．实验动物分组：健康SD大鼠492只，体重200～230g，雌雄不限。根据使用保存液的种类将大鼠随机分为SWH液组和UW液组。再根据不同的检测指标进行以下分组：(1)将SWH液组、UW液组分为单纯保存8h、12h、18h三个亚组，每个亚组8只大鼠；分为保存8h、12h、18h，肝脏移植术后1h和12h，共六个亚组，每个亚组8对大鼠，进行肝脏组织形态学、肝重、能量代谢、酶学、丙二醛及凋亡的检测。(2)SWH液组、UW液组分为保存8h、12h、18h三个亚组，每个亚组6对大鼠，观察移植后肝脏分泌胆汁的情况。(3)将SWH液组、UW液组分为保存8h、12h、18h三个亚组，每个亚组15对大鼠，观察肝移植术后7d动物存活率。 3．原位肝移植模型的建立：采用双袖套法建立原位肝移植模型及胆道外引流模型。 4．研究内容及检测方法：SWH液组和UW液组分别冷保存肝脏8、12、18h后，以及原位肝移植术后1h、12h，分别观察以下内容：肝脏大体形态、光镜、电镜下病理改变、保存前后肝脏重量的变化、肝脏能量代谢状态(ATP、TAN、EC)、肝脏酶学(ALT、AST、LDH)、肝移植术后胆汁分泌、肝脏组织中MDA含量、肝细胞凋亡以及肝移植术后动物7d存活率，通过以上指标的比较，初步判定SWH液对SD大鼠肝脏的保存效果。第三军医大学博士学位论文 5.统计处理:所得计量资料以均数士标准差表示，采用方差分析，计数资料采用x2检验，以P<0.05表示相差显著，以P<0.01表示相差非常显著。 结果:1.大体形态的变化:SWH组较UW组灌注均匀，UW液组肝脏可见散在的红色斑点和斑块，以肝脏边缘为主;肝脏复流后，肝脏迅速恢复为鲜红色，但是UW液组较SWH液组血流灌注不均匀，花斑状更明显。 2.光镜检查:随着保存时间的延长，两组均出现肝细胞肿胀、空泡样等肝细胞变性和点状坏死及灶性坏死等变化，肝移植术后上述变化进一步加重，肝窦淤血明显，且可见染色质固缩的凋亡细胞。SWH组和UW液组相比，在各时相点肝细胞形态学改变SWH组在程度范围上略轻于UW液组。 3.透射电镜检查:随着保存时间的延长，两组均出现肝细胞肿胀，狄氏间隙扩大，线粒体和内质网肿胀，毛细胆管内扩张，腔内微绒毛变少，细胞连接疏松、髓鞘样变等改变，可见明显的肝实质细胞凋亡形态特征，表现为细胞核体积缩小且皱缩变形，染色质凝结成块并聚集于胞核边缘形成环状或新月型，且胞浆内可见典型的凋亡小体;肝移植术后上述病理改变进一步加重，出血坏死明显增多，中性粒细胞浸润明显，以上变化在SWH液组和UW液组之间未见明显差异。 4.保存前后肝脏重量的变化:UW液组保存8h、12h、18h，肝脏重量均较保存前减轻，分别为保存前的74.6%、71.9%、84.4%;SWH液组保存8h、12h、18h，肝脏重量均较保存前略有增加，分别为保存前的101%、104%、102%。 5.肝脏能量代谢:SWH液组和UW液组肝脏随着保存时间的延长，ATP、TAN及EC水平均迅速下降，保存18h组与保存8h组比较相差显著，SWH液组和UW液组相差不显著;移植后，各组八TP及EC水平均迅速升高，TAN水平变化不大，但是保存18h组八TP、TAN、EC恢复水平明显低于保存8h组，保存12h组与保存8h组相差不显著;各时相点SWH液组均较UW液组八TP、EC水平略低。 6.肝脏酶学:SWH液组和UW液组肝脏低温保存后AST、ALT、LDH增高，并随保存时间延长，升高幅度越大，保存18h组明显高于保存8h组，而保存12h组与保存sh组比较仅略有上升。移植后AST、ALT、LDH进一步增高，且随保存时间和再灌注时间的延长，升高幅度增大，移植前后AST、ALT、LDH活性存在显著性差异。SWH液组和UW液组再灌注前后各时相点比较，AST、ALT、LDH相差不显著，但是SWH液组有低于UW液组的趋势。 7.肝移植术后胆汁分泌:保存8h时，两组均为6/6肝脏具有分泌胆汁的功能;保存12h，SWH液组5/6肝脏具有分泌胆汁的功能，而UW液组为4/6，两组间差异不显第三军医大学博士学位论文著;保存18h，SWH液组和UW液组具有分泌胆汁功能的肝脏数量均为3/6。 8.肝脏组织中丙二醛含量:SWH液组和UW液组肝脏低温保存后，随着保存时间的延长，MDA略增高。移植后各组MDA?