【摘 要】
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本研究为了探究月季TCP9基因对花器官发育调控的影响,应用CRISPR/Cas9技术构建植物双元表达载体,经检测结果显示,成功构建了含月季TCP9基因的植物双元表达载体。以拟南芥作为
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本研究为了探究月季TCP9基因对花器官发育调控的影响,应用CRISPR/Cas9技术构建植物双元表达载体,经检测结果显示,成功构建了含月季TCP9基因的植物双元表达载体。以拟南芥作为受体材料,采用农杆菌介导的花序侵染法对拟南芥进行侵染转化,并获得了拟南芥转化植株;以月季作为受体材料,建立了月季植株再生体系,采用农杆菌介导法对月季胚性愈伤组织进行浸染转化试验,初步建立了月季遗传转化再生体系,并得到以下主要结论:1.本研究应用CRISPR/Cas9技术对月季TCP9基因进行编辑,利用相关PCR手段,通过内外双环4引物PCR对目的基因片段进行扩增,采用T4连接酶对目的基因片段进行酶切链接反应。把特定的月季TCP9基因片段插入pHSE401质粒载体中,经测序检测等表明成功构建了植物双元表达载体pHSE401-TCP9。2.以拟南芥为受体材料,采用农杆菌介导的花序侵染法对拟南芥花序进行侵染转化,并获得拟南芥转化植株,转化植株的花器官表型有明显变异,主要表现为花瓣增多,雄蕊数目减少,雌蕊柱头弯曲。初步推测月季TCP9基因对植物花器官发育形成有一定的调控能力。3.通过卡那霉素和头孢霉素对月季胚性愈伤共同作用试验,为保证月季胚性愈伤组织的正常发育和防止农杆菌过度生长,选择含有卡那霉素50mg/L和头抱霉素200mg/L的培养基做为月季胚性愈伤遗传转化体系中抗生素比较理想的筛选压。
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