5-Aza-CdR对MG63骨肉瘤细胞RASSF1A基因表达及细胞增殖的影响

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目的:本研究选择RASSFIA作为研究目标,探讨不同浓度的甲基化转移酶抑制剂5-Aza-CdR(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-氮杂-2’脱氧胞苷)干预骨肉瘤细胞系MG63后对其RASSF1A抑癌基因mRNA和蛋白表达及细胞增殖的影响。研究方法:(1)细胞增殖情况的检测:培养骨肉瘤MG63细胞,2-3天传代一次。取生长良好的细胞,分别用不同浓度剂量(0、5、10、50μmol/L)的5-Aza-CdR处理,处理不同时间(24h、48h、72h、96h)后,MTT法检测各组细胞的增殖情况。(2)不同浓度5-Aza-CdR处理MG63细胞系后RASSFIA基因mRNA表达变化情况:培养骨肉瘤MG63细胞,并提取细胞总RNA,采用RT-PCR法扩增经不同浓度剂量(0、5、10、50μmol/L)5-Aza-CdR处理MG63细胞系72h后的细胞RASSFIA基因mRNA转录水平。(3)不同浓度5-Aza-CdR处理MG63细胞系后RASSFla蛋白的表达变化情况:细胞MG63分别用不同浓度剂量(0、5、10、50μmol/L)的5-Aza-CdR处理72h后,经0.2%胰酶处理,离心收集细胞,经western-blot检测MG63细胞系RASSFla蛋白的表达水平。结果:(1)细胞增殖的变化:骨肉瘤细胞MG63经0-50μ mol/L5-Aza-CdR诱导96h后,MG63细胞增殖减少,细胞生长速度明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。(2) RASSFIA基因表达的变化:经0-50μ mol/L5-Aza-CdR诱导72h后骨肉瘤细胞MG63的RASSFIA基因表达经RT-PCR及WB检测显著上调,与实验对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(3) RASSFIA基因表达的抑癌作用:研究中我们发现,5-Aza-CdR处理MG63细胞系后,细胞增殖速度明显下降,同时RASSFIA基因的转录及翻译水平明显上调。结论:骨肉瘤MG63细胞系经5-Aza-CdR的干预后,随着干预浓度的增加抑癌基因RASSFIA的mRNA及蛋白表达上升,同时MG63细胞的增殖速度下降。
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