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【目的】白细胞介素2主要是由激活的T淋巴细胞产生的一类重要的细胞因子,具有激活淋巴因子活化的杀伤细胞(LAK)和自然杀伤细胞,刺激T辅助细胞和自然杀伤细胞产生细胞因子和促进细胞因子的繁殖以及刺激T细胞在体外生长等功能,因此它是在免疫调节中有重要作用。猪IL-2基因的成功克隆与活性的测定具有十分重要的意义。本研究旨在获得具有生物学活性的重组猪白细胞介素2,为构建新型基因工程疫苗奠定基础。【方法】以经刀豆球蛋白A(ConA)诱导的猪外周血淋巴细胞中提取的总RNA为模板,应用RT-PCR等技术扩增和克隆猪白细胞介素2的全基因,亚克隆猪白细胞介素2成熟蛋白基因于真核表达载体pPICZαA上,构建重组真核表达载体,电转化巴斯德毕赤酵母X-33建立重组猪白细胞介素2的酵母表达系统,并以MTT比色法测定表达产物的生物学活性。【结果】以猪外周血淋巴细胞中提取的总RNA为模板,以RT-PCR技术扩增获得大小约500bp目的条带,连接pMD18-T载体并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经挑斑、琼脂糖凝胶电泳、EcoRⅠ和SalⅠ双酶切及测序鉴定,获得含猪白细胞介素2基因重组质粒pMD18- T-PoIL-2的阳性克隆菌。再以该重组质粒为模板,PCR扩增出猪白细胞介素2成熟蛋白的基因片段,连接真核表达载体pPICZαA并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经挑斑、XhoⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定,成功地构建了重组猪白细胞介素2成熟蛋白基因的真核表达载体pPICZαA-PoIL-2。电转化pPICZαA-PoIL-2于巴斯德毕赤酵母X-33,经筛选、PCR鉴定,获得含猪白细胞介素2成熟蛋白基因的重组酵母菌株,诱导表达后进行表达产物的SDS- PAGE鉴定,可产生相对分子质量约为18ku的表达产物,表明成功地建立了重组猪白细胞介素2的酵母表达系统。以MTT比色法测定,该重组猪白细胞介素2具有对猪外周血淋巴细胞的生物学活性。【结论】本研究成功地建立了重组猪白细胞介素2成熟蛋白的酵母表达系统,该重组猪IL-2具有对猪外周血淋巴细胞的生物学活性。