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荷叶铁线蕨（Adiantum reniforme var.sinense）是一中国特产的濒危蕨类,仅分布于长江三峡流域的局部地区。由于长江三峡水利工程的建设和当地居民的过度采挖,其自然生长地受到了严重的损害,从而导致其数量剧减。自该物种在四川万县被发现以来,其不仅作为第四纪孑遗植物引起了植物学家的关注,还作为一种新型的观赏植物引起了园林学家的重视。对它开展育种研究,不仅对于不断推出花卉新品、增加园林绿化、美化的配植材料和丰富园林植物的生物多样性,提高园林景观的观赏价值和生态效益等,还对保护珍稀濒危植物,合理利用野生资源,探讨珍稀濒危植物的濒危机制等方面具有较高的学术价值。本文在以荷叶铁线蕨的离体再生培养体系的构建为基线,研究和探讨了荷叶铁线蕨配子体和孢子体发育,不同培养条件和激素孢子体增殖的影响。主要结果如下:1)荷叶铁线蕨孢子为典型的四面体结构,三裂缝,黄褐色,其外周壁附片状鳞片。孢子萌发类型为书带蕨（Vittaria）型。原叶体以铁线蕨（Adiantum）型发育模式,进行生长发育。自然条件下,播种后40-60天,原叶体开始有性器官的分化,配子体以雌性配子体为主,雌雄同体较少。孢子体是由原叶体的种内杂交形成,一个原叶体生成一个孢子体。孢子体生长需约一年后,才能产生孢子。2)建立了一种简单易行的孢子消毒灭菌及播种的方法。通过该方法进行孢子消毒灭菌,不仅可以有效的降低孢子在消毒灭菌中的流失,还可以根据需要调整孢子播种的密度。3)离体培养发现,MS培养基中的大量元素浓度和蔗糖浓度较低时,有利于孢子的萌发和原叶体的前期生长。全量的MS培养基和15-30 g/L蔗糖,有利于原叶体的后期生长和性器官的分化,颈卵器形成较早。配子体多为雌性配子体为主,雌雄同体极少,罕有孢子体产生。蔗糖浓度过高（4.5-6%,w/v）会抑制原叶体的正常生长与发育,并导致原叶体的形态异常。组织培养条件下,无明显孢子体产生。4)离体培养条件下,通过在培养基中添加适量的外源Ca2+,进行适时的处理,可以促进单个原叶体的分生区的增加、性器官显著增多、并诱导少数单个原叶体产生3-5个孢子。而相对较短时间的持续Ca2+作用,会抑制可产生多孢子体的原叶体的孢子体的形成,而促进少量经Ca2+处理而未形成孢子体的原叶体的多孢子体的形成。一段时间的BA和NAA激素的组合处理后,可以促进原叶体上的精子器的分化和颈卵器的增多,并进行有性生殖产生4倍体的孢子体,但持续的激素作用会,抑制孢子体的形成。在无激素作用的条件下,这类原叶体的精子器和颈卵器的数量会减少,并进行无性生殖,由原叶体体细胞直接分化形成2倍体的孢子体。5)不同的激素对孢子体的离体器官培养的作用是不同的。BA、KT与ZT在培养前期都能促进孢子体试管苗产生GGB,但从GGB的分化率、GGB的大小及增殖来看,BA效果最佳。在培养后期,BA仍然促进GGB的增殖,KT与ZT在后期的培养中则会促进前期所形成的GGB分化成苗,相比而言ZT对GGB的成苗分化效果较KT明显。低浓度的IBA与NAA均能促进荷叶铁线蕨试管苗的走茎伸长和叶片的伸展;在IBA与NAA较高浓度下,试管苗的走茎伸长受到抑制,而促进丛生苗的增殖。2,4-D促进孢子体形成愈伤组织。