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目的：探讨siRNA单独或联合沉默uPAR和Cathepsin B基因对肝癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响。方怯：用带荧光的siRNA转染人类肝癌细胞(SMMC-7721),筛选合适的siRNA转染浓度,以该浓度进行实验。分别人工构建并合成靶向沉默uPAR和Cathepsin B基因的三条siRNA和一条阴性siRNA。转染人类肝癌细胞SMMC-7721后,实时荧光定量PCR技术和WB技术分别检测基因水平上和蛋白水平上沉默uPAR和Cathepsin B基因最好的siRNA,筛选出的两个siRNA用于后续实验。单独或联合转染后,荧光定量PCR技术和WB技术分别检测uPAR和Cathepsin B的基因表达水平和蛋白表达水平。MTT实验检测单独或联合沉默uPAR和Cathepsin B基因后癌细胞的增殖情况。基质胶侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变。流式细胞技术检测肝癌细胞凋亡率的变化。结果：1.按Roch说明书,从不同比例的转染试剂和siRNA中筛选出转染最佳浓度,我们发现低浓度siRNA进行转染,转染率达80%,细胞状态最好。2.按低浓度siRNA进行转染,实时荧光定量PCR法分别检测各组肝癌细胞SMMC-7721的uPAR和Cathepsin B基因水平。结果显示,转染48h后,与空白对照组(no-treatment control, NTC)相比,三个siRNA组的uPAR和Cathepsin B基因mRNA的相对表达量均受到明显抑制(P<0.05)。由数据看出,在基因水平上,si-uPAR-C沉默uPAR基因效果最好,si-CTSB-B沉默Cathepsin B基因效果最好。3.转染后72h,WB法分别检测各组uPAR和Cathepsin B的蛋白水平。结果显示,与空白对照组相比,三个siRNA组的uPAR和Cathepsin B蛋白的相对表达量受到明显抑制(P<0.05)。由数据看出,从蛋白水平上来说,si-uPAR-C沉默uPAR的效果最好,si-CTSB-B沉默Cathepsin B的效果最好。综合基因和蛋白检测的结果,uPAR基因选择si-uPAR-C片段,Cathepsin B基因选择si-CTSB-B片段进行后续实验。4.单独或联合沉默实验共设五组(NTC、LC、si-uPAR、si-CTSB、si-UC),实时荧光定量PCR分别检测单独或联合沉默后uPAR和Cathepsin B的基因水平。结果显示,转染48h后,与NTC组相比,uPAR基因在si-uPAR和si-UC表达受到明显抑制,CTSB基因在si-CTSB和si-UC表达受到明显抑制,而且联合沉默组比单独沉默抑制效果更明显(P<0.05)。5.WB检测转染72h后,各组SMMC-7721细胞uPAR和Cathepsin B的蛋白水平。结果显示,与NTC组相比,uPAR蛋白在si-uPAR和si-UC组表达受到明显抑制,Cathespin B在si-CTSB和si-UC表达受到明显抑制,联合沉默组均比单独沉默组抑制效果更明显(P<0.05)。6.MTT实验检测联合沉默后Oh、24h、48h、72h细胞增殖情况。转染24h后,si-CTSB组、si-UC组与NTC组相比细胞增殖明显较少(P<0.05),转染48h后,si-uPAR组与NTC组相比细胞增殖明显减少(P<0.05),而且转染48h后,联合沉默组比单独沉默组细胞增殖抑制更明显(P<0.05)。NTC组与LC组差异无统计学意义(P>0.05)。7.侵袭实验显示,转染后后48h,与空白对照组间比较,各siRNA组侵袭的细胞数明显减少(P<0.05),联合沉默组比单独沉默组减少更明显(P<0.05)8.流式细胞技术检测细胞调亡,转染后48h,单独或联合沉默组中凋亡细胞比NTC组明显增多(P<0.05),联合沉默组凋亡细胞较单独沉默组明显增多(P<0.05)。结论：siRNA靶向沉默uPAR或Cathepsin B基因能有效减少该基因的表达。单独沉默或联合沉默uPAR或Cathepsin B基因均能有效抑制肝癌细胞的增殖和侵袭,促进肝癌细胞凋亡,而且联合沉默效果更好。