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赭曲霉毒素是由真菌如曲霉菌(Aspergillu)和青霉菌(Penicillium)分泌的有毒代谢物。真菌在农产品中大量滋生，它的代谢物存在于各种农业原材料和商品中。真菌毒素具有400多种不同的化学结构，其中赭曲霉毒素A(Ochratoxin A，OTA)是其主要的组成部分。OTA具有肾毒性、免疫毒性和致畸作用，被国际癌症研究机构(IARC)归类为致癌物质。现如今，最常用的检测方法为仪器分析法和免疫分析法。仪器分析法包括质谱法和高效液相色谱法。该方法往往需要昂贵的仪器、操作繁琐且需要专业的技术人员。免疫分析法包括酶联免疫分析、放射免疫分析和胶体金免疫分析等。该方法具有操作简单、灵敏度高、特异性强的优点，可以快速检测大量的待测样品。本实验制备了OTA单克隆抗体，研制出直接竞争ELISA试剂盒，从而建立了快速、灵敏的OTA的检测方法。 本研究将OTA和牛血清白蛋白(Bovine serum albumin，BSA)偶联合成免疫原OTA-BSA，把OTA和鸡卵清蛋白(Ovalbumin，OVA)偶联合成检测原OTA-OVA。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和紫外扫描的方法，鉴定合成的抗原，结果显示合成成功。OTA-BSA和OTA-OVA偶联比分别为7.5∶1与5∶1。免疫结果表明OTA-BSA免疫的小鼠，产生了免疫应答。用OTA-OVA包板进行检测，其中1号小鼠免疫效果最好，其多抗血清效价最高可达1∶51200，半数抑制浓度IC50为7.98ng/mL。 选取免疫效价为1∶51200小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合。取杂交瘤细胞上清液，采用间接ELISA法测其效价，用间接竞争ELISA法测其抑制，从而筛选阳性克隆。通过3轮亚克隆，共得到6株阳性克隆细胞株，分别命名为1F5、2C5、2D7、2G3、3D7和3F6。选择阳性值最高的2G3制备腹水，之后对腹水进行纯化。采用SDS-PAGE鉴定，纯化后单克隆抗体只含有2条清晰的条带，分子量分别为50kDa和25kDa，说明得到的单克隆抗体纯度高。通过ELISA鉴定，2G3纯化前后的效价都达到1∶8.192×107，IC50为1.24ng/mL，亲和力常数为2.11×1011mol/L。用亚型鉴定试剂盒检测2G3，其亚型为IgG1、κ轻链型。该细胞株特异性高，敏感性好，可以用来研制试剂盒。 采用过碘酸钠法，将2G3连接到HRP上，制备得到酶标抗体。根据酶联免疫吸附试验的原理，应用酶标抗体，研制出直接竞争ELISA试剂盒，从而快速检测OTA残留。经条件优化后，OTA浓度与结合率呈良好的线性关系(y=-31.186x+60.756，R2=0.9718)，IC50为2.21ng/mL，加标样品回收率范围为80.3％～108％。该试剂盒与赭曲霉毒素B、C的交叉反应率分别为3.6％和0.29％，与其他生物毒素均无交叉反应。板间和板内平均变异系数分别为6.41％和7.07％。玉米、小麦和花生样品OTA的检测限分别为0.134、0.203和0.292ng/mL。本研究制备的直接竞争ELISA(cd-ELISA)试剂盒，可以用于快速定量检测食品以及饲料中的OTA。