内皮素-1(endothelin-1，ET-1)是一含21个氨基酸的多肽，最先于1988年发现由血管内皮细胞分泌，有很强的缩血管作用。近年来发现在急慢性炎性疼痛、神经性疼痛、肿瘤性疼痛，特别是骨转移性癌疼痛中的痛觉过敏与自发痛中的形成维持起重要作用。 辣椒素受体TRPV1(transientreceptorpotentialvanilloidsubtype1)是1997年才克隆成功的，TRPV1是一种多型信号探测器及多种疼痛刺激的整合器，可被辣椒素类物质、热刺激(43℃)和氢离子(proton)激活，在疼痛的发病机制中占有很重要的地位，许多炎性介质通过活化TRPV1而发挥致痛作用。一直是近年来疼痛领域的研究热点， 体外研究发现ET-1可增强辣椒素引起背根神经节神经元细胞内游离钙浓度上升的幅度，小鼠足底注射ET-1可促进辣椒素引起的伤害性作用，本文通过使用敲除TRPV1基因的小鼠从整体动物水平上来研究探讨TRPV1在外周应用ET-1引起疼痛中的作用，通过应用膜片钳技术了解细胞水平机制，旨在进一步了解一些慢性疼痛，骨转移痛的发病机制，从而对于缓解与治疗疼痛的研究发挥一定的作用，并进一步完善对辣椒素受体的研究。 (一)材料与方法 1.实验动物和材料雄性5周龄TRPV1基因敲除小鼠(KO小鼠)及其野生型C57BL/6小鼠(WT小鼠)分为KO组及WT组。 2.分组内脏痛研究KO小鼠与WT小鼠按50μg/Kg、25μg/Kg、12.5μg/Kg、4μg/Kg、0μg/Kg腹腔内注射ET-1(每组每一剂量n=10)，进行药物注射后小鼠的行为学观察，并记录扭体反应的情况。 热痛觉研究KO小鼠与WT小鼠分别按0pmol、3pmol、10pmol、30pmol、100pmol的剂量足底注射ET-1(每组每一剂量n=6)，测量注药前与注药后15min、30min、45min及60min热痛觉阈值。 自发痛研究K0小鼠与WT小鼠分别按0pmol、30pmol、100pmol、400pmol(每一剂量n=6)的剂量足底注射ET-1，观察一小时之内动物咬或舔注射侧下肢的时间。 ETA拮抗剂和PKC抑制剂对ET-1引起热痛觉过敏作用的研究WT小鼠分为PBS对照组、内皮素受体A亚型(endothelinAreceptor，ETA受体)拮抗组、蛋白激酶C(proteinkinaseC，PKC)阻滞组(n=6)，PBS对照组足底皮下注射PBS10μL15min后足底注射10pmolET-1，ETA受体拮抗组足底皮下注射BQ1233nmol20min后足底注射10pmolET-1，PKC阻滞组足底皮下注射5nmolBisindolylmaleimideI15min后再注射10pmolET-1，测量注药前、最后一次注药后15min、30min、45min及60min的热痛阈值。 ET-1对辣椒素引起DRG神经元全细胞电流的作用培养DRG神经元细胞，应用膜片钳进行全细胞电流记录，记录10nMET-1灌流100s前后100nM辣椒素10s引起全细胞电流的变化。 3.统计学方法发生一次以上的扭体为阳性，为计数资料，扭体反应阳性率=扭体阳性动物只数/10*100％，两组之间的阳性率比较采用x2检验。其它结果用x±s表示，组内药物注射前后的检验采用配对t检验，电生理学数据使用非配对t检验，其它数据经方差分析后采用Newman-Keulspost-hoc检验。P＜0.05有统计学意义。 (二)结果 两组动物腹腔内注射ET-1后均出现扭体，但WT组在各剂量时扭体反应发生率均明显高于KO组，扭体次数在剂量为50μg/Kg、25μg/Kg、12.5μg/Kg时明显高于KO组。 两组动物ET-1足底注射后热痛阈值降低，在WT组降低幅度更明显，WT组热痛阈值随着ET-1剂量的增加而降低，KO组剂量达到100pmol时热痛阈值降低幅度小于30pmol时热痛阈值降低幅度。除WT组ET-1注射剂量为3pmoI外，注射ET-1后15min时逃避反应的时间缩短最为明显，后渐渐恢复。而KO组恢复要快于WT组，WT组注射100pmol在一小时后仍不能恢复，KO组在注射药物45min后已全部恢复。 WT与KO小鼠足底注射PBS后无明显自发痛表现，注射30pmol的ET-1在WT组引起自发痛。WT组足底注射ET-1后咬或舐注射侧肢体的时间明显长于KO组。 提前注射3nmolBQ123或5nmolBisindolylmaleimideI可完全抑制随后注射l0pmol的ET-1引起的热痛觉过敏，注射PBS对随后注射ET-1引起的热痛觉过敏没有影响。 70％中小细胞神经元对100nM辣椒素有反应，产生内向电流，其中30％的神经元在应用ET-1后辣椒素引起的内向电流增加。 (三)结论 ET-1通过作用于ETA受体激活PKC途径引起伤害性作用，并部分通过TRPV1起作用。