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背景:胰腺癌(pancreatic cancer)是一种致死率极高的胃肠道消化性肿瘤,在全球和癌症相关的死亡中,胰腺癌排第四位,预后效果非常差,5年生存率<6%。而神经侵袭(perineural invasion,PNI)是胰腺癌最常见的侵袭路径,但目前为止,其发生发展机制尚不清楚。目的:探究神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对胰腺癌细胞迁移侵袭的影响;建立胰腺癌细胞系MIA PaCa-2和小鼠神经共培养模型,探讨胰腺癌细胞和神经组织之间的相互作用及其对胰腺癌细胞中CD133+/CXCR4+比例的影响,进而探究其在胰腺癌PNI发生中的作用。方法:在第一部分实验中,我们收集了手术切除并经病理确诊的胰腺癌及癌旁组织标本25例,对其进行免疫组织化学染色(Immunohistochemical staining,IHC)检测NGF和CD133在胰腺癌组织和癌旁组织中的表达情况。选取了胰腺癌的4种细胞株Capan-2,MIA PaCa-2,SW1990和PANC-1,通过蛋白免疫印迹(Western Blotting)检测了经外源蛋白NGF,过表达NGF质粒及NGF的小干扰RNAs对CD133蛋白水平的影响。随后通过ERK1/2通路的抑制剂PD98059和siERK1/2阻断该通路,检测了MIA PaCa-2和SW1990细胞使用外源NGF和过表达NGF后CD133的表达情况。同时应用报告基因实验技术检测不同处理组对CD133启动子P5转录水平的影响,应用细胞流式术和免疫荧光共聚焦技术检测不同处理情况下CD133的细胞内质膜转移。然后通过实时荧光定量PCR检测NGF/ERK/CD133通路在胰腺癌细胞MIA PaCa-2、SW1990上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)进程中的作用。最后分别应用划痕实验和Transwell小室检测不同处理组MIA PaCa-2和SW1990细胞的迁移和侵袭情况。在第二部分实验中,我们首先建立了胰腺癌细胞MIA PaCa-2和小鼠神经共培养模型,用显微镜观察其相互作用并拍照。同时收集共培养上清,用其处理MIA PaCa-2细胞,通过流式细胞术检测CD133+/CXCR4+比例变化;CCK-8检测神经与胰腺癌细胞相互作用和CD133对MIA PaCa-2增殖能力的影响;Western blotting检测不同处理组MIA PaCa-2细胞中凋亡和EMT相关蛋白的表达;Transwell小室检测神经与胰腺癌细胞相互作用和CD133对胰腺癌细胞转移侵袭能力的影响。结果:IHC和Western blotting结果显示,NGF和CD133虽然在胰腺癌组织和癌旁组织都有表达,但在癌组织中的表达明显高于癌旁组织。Western blotting结果显示在Capan-2,MIA PaCa-2、SW1990、PANC-1中NGF会同时上调总的CD133和膜上CD133的表达。流式细胞分析术和免疫荧光共聚焦结果显示,NGF会上调CD133的膜蛋白表达量,但这种作用在加入PD98059,siERK1/2或siNGF后明显降低。划痕实验和Transwell小室实验显示,NGF会促进胰腺癌细胞MIA PaCa-2的迁移和侵袭,但加入PD98059和siCD133后这种作用显著地降低了。神经组织和胰腺癌细胞共同作用,可上调胰腺癌细胞MIA PaCa-2中CD133+/CXCR4+的双阳比例,促进MIA PaCa-2增殖,抑制其凋亡,促进EMT及转移侵袭能力。结论:体外实验证实,NGF可通过激活ERK1/2/CD133信号分子促进胰腺癌细胞的迁移和侵袭;神经组织和胰腺癌细胞相互作用促进胰腺癌细胞沿神经周围生长,增强细胞CD133、CXCR4表达,调控细胞迁移侵袭的能力。由以上结果可以得出神经因子可通过上调CD133的表达而调控胰腺癌PNI的发生,这或许可为临床上胰腺癌的治疗提供新的靶点。