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[背景和目的]膀胱癌为泌尿生殖系统肿瘤中最常见的恶性肿瘤,最新研究表明其发病率逐年上升。膀胱癌复发率高,5年复发率高达50%-90%,且大约35%的非肌层浸润性癌在复发时恶性程度会增加,如得不到及时治疗,约10%-20%可发展成为肌层浸润性癌而行根治性膀胱全切加尿流改道术,同时也可能会出现排尿异常、肠管闭锁及性功能障碍等并发症,给患者社会活动带来极大不便,使患者生活质量严重下降,同时给患者带来巨大的经济、心里压力。因此,对膀胱癌患者进行早期有效的诊断及治疗并预测其复发风险是临床上亟待解决的问题。近年来尿液修饰核苷作为一种新型的肿瘤分子标志物逐渐被人们所重视,它的分子质量比较小、分子结构比较稳定,不易与其它物质发生反应,尿液样本收集储存均较容易,留取尿样即可进行测定,且此种检测方法具有无创性,检测范围不受肿瘤病理分型甚至肿瘤种类的限制,患者容易接受等优势。研究表明,尿液中修饰核苷的水平可用于多种肿瘤的诊断、疗效评价及预后监测。我们前期研究已经证实有4中尿液修饰核苷分子在膀胱癌患者尿液中的水平显著高于正常人,他们分别是1-甲基腺苷(m1A)、N4-乙酰胞苷(ac4C)、06-甲基鸟苷(06-MeG)、1-甲基次黄苷(1-MeI),且1-甲基腺苷(m1A)和1-甲基次黄苷(1-MeI)2种尿液修饰核苷联合检测对膀胱癌的诊断及预测预后具有重要意义,可作为膀胱癌的首选肿瘤标志物。然而尿液修饰核苷在膀胱癌患者中明显升高的机制目前仍不清楚,研究认为恶性肿瘤细胞中存在高活性的tRNA修饰酶,可对正常结构的tRNA进行高度修饰产生异常tRNA,后者代谢.过程中即可产生大量修饰核苷。m1A是由A经tRNA甲基转移酶催化转变而形成。研究表明人体内催化m1A形成的tRNA甲基转移酶是m1A58甲基转移酶,即hTrm6p/hTrm61p。本研究通过检测膀胱癌患者及正常健康人尿液中m1A水平、膀胱癌患者手术切除的癌组织和癌旁组织中hTrm6p/hTrm61p的差异表达、癌组织中hTrm6p/hTrm61p的表达水平与同一患者尿液中m1A水平之间的关系及hTrm6p/hTrm61p的表达水平与临床病理特征之间的关系来探讨hTrm6p/hTrm61p在膀胱癌患者尿液中mlA高水平表达中的作用,进而为从基因表达调控水平上进一步揭示其机制打下基础,也为m1A作为膀胱癌肿瘤标志物的临床应用提供理论及实验依据。[方法]选取经病理证实的膀胱尿路上皮癌患者32例；其中男性25例,女性7例；其中初发22例,复发10例；组织学分级：Ⅰ级14例,Ⅱ级10例,Ⅲ级8例；浸润性癌18例,非侵润癌14例；手术为膀胱全切或部分切除术；患者术前留取尿液,术中留取癌组织及癌旁组织。选取16个正常健康人作为对照组。采取高效液相色谱／电喷雾-四极杆-飞行时间-质谱技术(HPLC/ESI-Q-TOF-MS)检测膀胱尿路上皮癌患者和正常健康人尿液中m1A表达水平：用western blot方法检测膀胱癌患者癌组织及癌旁组织中hTrm6p/hTrm61p的表达水平。[结果]1.膀胱癌组尿液中m1A水平(5.76±0.90)明显高于健康志愿者尿液中m1A水平(2.79±0.54),差异有统计学意义(p<0.05),且膀胱癌组每位患者尿液中m1A水平均高于对照组。2.32对癌组织中有31对(97%)hTrm6p/hTrm61p蛋白的表达量明显高于癌旁组织,hTrm6p/hTrm61p在膀胱癌组织中表达为(0.701±0.259),与其在癌旁组织中的表达(0.443±0.239)相比较,差异有统计学意义。3.初发患者hTrm6p/hTrm61p表达水平为0.679±0.250,复发患者为0.743±0.283,t=-0.641,P=0.526>0.05,差异无统计学意义；男性患者hTrm6p/hTrm61p表达水平为0.703±0.273,女性患者为0.696±0.221,t=0.057,P=0.955>0.05,差异无统计学意义；浸润性癌患者hTrm6p/hTrm61p表达水平为0.689±0.272,非浸润性癌患者为0.716±0.251,t=-0.289,P=0.775>0.05；组织学分级之间F=1.176,P=0.323>0.05,各组之间无显著性统计学差异,进一步S-N-K法两两比较中P=0.412>0.05,即两组之间无统计学显著性差异。4.尿液中m1A水平有随癌组织中hTrm6p/hTrm61p蛋白表达水平的升高而上升的趋势,对两变量做Pearson相关分析,r=0.799,p=0.000<0.05,认为尿液中m1A水平与癌组织中hTrm6p/hTrm61p蛋白表达水平之间有正相关关系。对两变量进一步做直线回归分析,决定系数R2=0.639,反映了尿液中m1A水平升高的原因中63.9%是癌组织中hTrm6p/hTrm61p蛋白表达水平增高所引起；检验结果F=53.018,P=0.000<0.05,即回归模型具有统计学意义,认为膀胱癌患者尿液中m1A水平的升高与癌组织中hTrm6p/hTrm61p蛋白表达水平的增高之间存在直线关系,可见常量和膀胱癌组织中hTrm6p/hTrm61p的表达水平均有统计学意义。常量a=3.816,回归系数b=2.782,回归方程为Y=3.816+2.782X。[结论]1.膀胱癌患者尿液中m1A的表达水平明显高于正常健康人尿液中m1A的表达水平,尿液m1A检测可作为对膀胱癌进行筛查和早期诊断的肿瘤标志物。2.同一患者癌组织中hTrm6p/hTrm61p的表达水平显著高于癌旁组织,且尿液中m1A的水平与癌组织中hTrm6p/hTrm61p的表达水平存在正相关性,提示hTrm6p/hTrm6lp的高水平表达是引起尿液中m1A水平升高的重要原因之一。3. hTrm6p/hTrm61p在膀胱癌组织中的表达水平与临床病理特征之间无明显相关关系。