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尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)是我国重要的经济鱼类之一。白介素10(IL-10)是一种多细胞源的细胞因子,不仅具有免疫抑制作用,也具有免疫促进作用。探究IL-10在鱼类免疫调节中的功能机制,为鱼类的健康养殖和疾病防治提供科学的实践指导和理论依据。 本研究首次成功克隆尼罗罗非鱼IL-10的cDNA全长和基因组序列,GenBank登录号分别为KP645180和KP645179。尼罗罗非鱼IL-10的cDNA全长1040bp,开放阅读框为549bp,编码182个氨基酸。基因组全长2117bp,包含5个外显子和4个内含子。通过构建原核表达载体,采用可溶性表达并纯化获得IL-10重组蛋白,制备小鼠抗罗非鱼IL-10多克隆抗体。 利用定量PCR和Western-blot技术检测IL-10在组织中的表达,发现IL-10在鳃中的表达量最高,在其它黏膜免疫器官中也有较高的表达量,表明鳃可能是IL-10发挥生物学功能的主要免疫器官,而且IL-10可能在黏膜免疫系统中发挥重要的免疫调节作用。以LPS对罗非鱼进行体内刺激,IL-10蛋白在第4周开始出现在血清中,与血清IgM抗体效价对比发现,IL-10与抗体分泌的调节有一定的正相关性。以LPS为免疫原对罗非鱼头肾巨噬细胞进行体外刺激,发现IL-10的表达出现下调后上升再下降的趋势。对比其他硬骨鱼的研究报道,证明罗非鱼IL-10可能具有调节巨噬细胞分泌因子的功能。