论文部分内容阅读
目的:近年来随着抗表皮生长因子受体靶向药物的出现,使得结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者的总生存期得到了显著延长。对于大部分晚期发生转移或者复发的患者,无法获取肿瘤组织标本进行基因检测以指导靶向治疗。本研究通过检测CRC患者肿瘤组织与对应血浆中KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA基因突变情况,分析血浆与肿瘤组织检测KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA基因突变的一致性,探讨利用血浆代替肿瘤组织检测CRC基因突变的可行性。方法:纳入Ⅰ期-Ⅳ期CRC患者175例,收集患者手术治疗之前的血浆,同时收集患者手术切除后经甲醛固定石蜡包埋的肿瘤组织。分别提取血浆和肿瘤组织中的DNA。运用二代测序技术分别检测肿瘤组织和对应血浆中KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA基因突变状态;分析结直肠癌患者KRAS、KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA之间的相关性以及与临床病理特征之间的关系;以肿瘤组织检测结果为参照,分析二代测序技术检测血浆与组织中KRAS、NRAS、BRAF及PIK3CA基因突变一致率、敏感性和特异性以及阳性预测值和阴性预测值。结果:1.在175例患者中,组织样本含有KRAS突变患者60例,野生型115例,突变率为34.3%;血浆样本含有KRAS突变患者39例,野生型136例,突变率22.3%。组织样本中NRAS突变患者为5例,野生型为170例,突变率2.9%;血浆样本中NRAS突变患者为4例,野生型为136例,突变率2.3%。组织样本中BRAF突变患者为5例,野生型为170例,突变率2.9%;血浆样本中BRAF突变患者为4例,野生型为136例,突变率2.3%。组织样本中PIK3CA突变患者为10例,野生型为156例,突变率5.7%;血浆样本中突变患者为8例,野生型为167例,突变率4.6%。有1例患者血浆中发现KRAS基因与PIK3CA基因双突变现象,而组织检测结果均为野生型。2.以组织检测结果为参照,血浆检测KRAS突变敏感性和特异性为55.0%和94.8%,阳性预测值和阴性预测值为84.6%和79.4%;检测NRAS敏感性和特异性为80.0%和100%,阳性预测值和阴性预测值为100%和99.4%;检测BRAF敏感性和特异性为80.0%和100%,阳性预测值及阴性预测值100%和99.4%;检测PIK3CA敏感性和特异性为70.0%和99.4%,阳性预测值及阴性预测值为87.5%和98.2%。血浆和组织KRAS基因检测一致率为81.1%(kappa=0.543);NRAS基因检测一致率为99.4%(kappa=0.886);BRAF基因检测一致率为99.4%(kappa=0.886);PIK3CA基因检测一致率为97.7%(kappa=0.655)。3.血浆样本中基因总突变率与病理分期有相关性,Ⅰ期(8.3%)vsⅡ期(5.6%)vsⅢ期(26.0%)vsⅣ期(48.9%)(p<0.05),差异有统计学意义;与性别和年龄无相关性(p>0.05)。血浆样本与组织样本检测基因突变Ⅰ期一致率为50.0%(Kappa=0.122);Ⅱ期一致率为61.1%(Kappa=0.137);Ⅲ期一致率为80.0%(Kappa=0.542);Ⅳ期一致率为88.9%(Kappa=0.778),两者一致率随着分期的增高而增加。4.175例CRC患者肿瘤组织中4例发生PIK3CA与KRAS交叉突变,而KRAS、NRAS、BRAF未发现交叉突变。KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA基因突变之间均无相关性,表明CRC患者的KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA基因突变互相独立。KRAS基因与病理分期有关(p<0.05),在病理分期越高的患者中突变率越高,与性别、年龄无关(p>0.05);NRAS、BRAF、PIK3CA基因与性别、年龄、病理分期均无关(p>0.05)。结论:1.CRC患者中KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA基因突变之间无相关性,各自独立;2.二代测序法检测血浆KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA基因突变具有较高的敏感性和特异性,与肿瘤组织检测对比具有较高的一致性;3.在CRC患者无法获得肿瘤组织标本时,尤其是晚期患者,可考虑用血浆代替组织检测的突变状态,用于指导患者的靶向个体化治疗。