甘蔗内生芽孢杆菌的分离鉴定及其促生机制研究

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甘蔗是我国最主要的糖料作物,在促进我国蔗区农民增加收入和扩大就业方面发挥着重要作用。广西是中国最大的制糖省,甘蔗种植面积大,病害发生种类多,为害严重。化肥农药的大量使用在一定程度上发挥了重要的作用,但过量施用导致的生产成本攀升及环境污染问题日趋严重,生物菌肥的开发利用为实现甘蔗绿色生产、提质增效提供了重要的保障。本研究通过对甘蔗根内生芽孢杆菌进行分离鉴定,揭示了芽孢杆菌在甘蔗中的种群分布情况,为甘蔗内生芽孢杆菌资源库的构建提供了理论依据。主要研究成果如下:1.通过16S rRNA基因测序,从甘蔗根中共分离鉴定了20株芽孢杆菌,并利用Rep-PCR技术证明甘蔗内生芽孢杆菌具有丰富的表型和遗传多样性。2.芽孢杆菌的促生(PGP)特性实验结果显示,13株(65%)芽孢杆菌能产生IAA,其分泌的IAA产量在11.38-35.74μg.m L-1之间,产量最高的是Bacillus velezensis Y8;10株(50%)芽孢杆菌能溶解无机磷;5株(25%)芽孢杆菌具有分泌嗜铁素的能力。3.使用8种病原真菌进行拮抗实验,结果发现所有芽孢杆菌都至少对1种病原真菌有抗性,Bacillus velezensis Y8对所有病原真菌均具有拮抗效果。4.以Bacillus velezensis Y8作为供试菌株,采用单因素法对它的发酵过程进行优化,实验结果表明,产生抗生素粗提物最多的发酵条件如下:发酵时间36 h、接种量5%、初始p H 7.0、发酵温度28℃、200 rpm,最佳培养基是NB培养基,采用优化后的条件进行发酵,产生的抗生素粗提物达到5.8 g.L-1。5.通过薄层色谱分析(thin layer chromatography,TLC)脂肽类抗生素合成酶相关基因克隆和液质联用图谱分析技术,判断Bacillus velezensis Y8菌株分泌的脂肽类物质是表面活性素(Surfactins)、泛革素(Fengycins)及伊枯草菌素(Iturins)的同系物。6.荧光显微镜和扫描电镜的实验结果证明Bacillus velezensis Y8菌株在甘蔗根和叶中具有较强的定殖能力。促生实验结果表明,Bacillus velezensis Y8对甘蔗地上部分和地下部分的生长有显著的促进作用。7.使用Bacillus velezensis Y8接种甘蔗在温室进行生防实验,结果表明,Bacillus velezensis Y8可以降低甘蔗黑穗病的发病率,表明它具有成为生防菌剂的潜力。
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