IL-1β对脂肪源性干细胞向软骨细胞诱导的影响

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目的:本研究旨在初步探讨在体外脂肪源性干细胞(ADSCs)向软骨诱导的过程中,不同浓度状态下IL-1β对脂肪源性干细胞向软骨分化的影响。方法:体外分离培养大鼠脂肪源性干细胞成功后,MTT法检测其生长曲线;荧光免疫法检测细胞;取第四代ADSCs培养在DMEM/F12培养液中(含10%FBS及其软骨诱导剂)同时在此培养液中依据加入的不同浓度的IL-1β (0. Olng/ml、0.2ng/ml、4ng/ml),共培养14天,提取各组总RNA,而后用实时荧光定量PCR检测成软骨基因(二型胶原基因,collagen Ⅱ;糖胺聚糖蛋白基因,GAG)和成脂基因(脂肪酸结合蛋白基因,Ap2)的表达量。结果:1、通过体外分离大鼠睾丸的脂肪组织可成功提取ADSCs,成功的标志为细胞免疫化学结果示其呈CD44和CD105阳性表达。同时证实,在诱导体系(ITS+地塞米松+Vc磷酸盐+TGF-βl)的作用下可将ADSCs成功向软骨分化。2、PCR结果示:14天时各实验组与对照组相比,Collagen Ⅱ基因表达量总体有统计学差异(p=0.02),且在4ng/ml的IL-1β浓度组中Collagen Ⅱ基因表达量(1.775±0.063)与对照组(1.680±0.033)相比明显增加(p=0.045)。3、PCR结果示:14天时实验组与对照组相比,GAG基因表达量总体有统计学差异(p=0.006),且在4ng/ml的IL-1β浓度组中GAG基因表达量(1.0571±±0.017)与对照组(0.974±0.087)相比明显增加(p=0.037)。4、PCR结果示:14天时实验组与对照组相比,Ap2基因表达量总体有统计学差异(p=0.000),且在0.01ng/ml的IL-1β浓度组中Ap2基因表达量(1.252±0.021;与对照组(1.193±0.038)相比有增加趋势(p=0.022);同时在4ng/ml的IL-1β浓度组中Ap2基因表达量(1.102±0.022)与对照组(1.193±0.038)相比有减少趋势(p=0.002)。结论:在IL-1β浓度为0.01ng/ml,0.2ng/ml时对ADSCs向软骨转化未见明显促进作用,但在IL-1β浓度为0.0lng/ml时有促使其成脂基因表达增加的作用;当IL-1β浓度为4ng/ml时,可促进ADSCs成软骨基因的表达,抑制其成脂基因的表达。
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